[發(fā)明專利]一種新的多肽——人亮氨酸拉鏈蛋白9.13和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00127358.2
• 申請日: 2000-11-10
• 公開（公告）號: CN1352160A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人亮氨酸拉鏈蛋白9.13，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

染色體DNA結(jié)合蛋白負(fù)責(zé)DNA分子遺傳信息的組織、復(fù)制和閱讀。這些DNA結(jié)合蛋白可以分為兩類：一是組蛋白，與DNA非特異性結(jié)合；另一類是非組蛋白，又稱序列特異性DNA結(jié)合蛋白。

其中，非組蛋白的特點(diǎn)是：(1)能識別特異的DNA序列，識別的信息來源于DNA核苷酸序列本身，識別位點(diǎn)存在于DNA雙螺旋的大溝部分；(2)識別與結(jié)合都靠氫鍵和離子鍵；(3)在不同的基因組之間，這些序列特異性結(jié)合蛋白所識別的DNA序列在進(jìn)化上是保守的；(4)雖然與DNA特異序列結(jié)合的蛋白質(zhì)在每個真核細(xì)胞中只有10000個分子左右，但卻具有多方面的重要功能。

非組蛋白的功能包括：(1)幫助DNA分子的折疊，以形成不同的結(jié)構(gòu)域，從而有利于DNA的復(fù)制和基因的轉(zhuǎn)錄；(2)協(xié)助啟動DNA的復(fù)制；(3)控制基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)基因表達(dá)。

根據(jù)對迄今發(fā)現(xiàn)的眾多DNA特異性結(jié)合蛋白的分析，發(fā)現(xiàn)它們可以分為不同的蛋白家族，與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，分別具有不同的結(jié)構(gòu)模式，比如鋅指模式(Zincfinger?motif)、alpha螺旋-轉(zhuǎn)角-alpha螺旋模式(helix-turn-helix?motif)和亮氨酸拉鏈模式(Leucine?zipper?motif)。

亮氨酸拉鏈模式(Leucine?zipper?motif)是一類序列特異性DNA結(jié)合蛋白家族，比如，酵母的轉(zhuǎn)錄激活因子(GCN4)，癌蛋白Jun、Fos、Myc以及增強(qiáng)子結(jié)合蛋白等等。所有的這些蛋白都含有4個或5個亮氨酸殘基，彼此之間精確的相距7個氨基酸殘基。這樣，在alpha螺旋的某一個側(cè)面每兩圈就出現(xiàn)一個Leu，這些Leu排成一排，兩個蛋白質(zhì)分子的alpha螺旋之間靠Leu殘基之間的疏水作用力形成一條拉鏈。這類蛋白與DNA的特異結(jié)合都是以二聚體形式起作用的，但與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域并沒有被證明存在于拉鏈區(qū)中。

轉(zhuǎn)錄水平的基因調(diào)控是真核細(xì)胞基因調(diào)控的主要環(huán)節(jié)，因?yàn)檗D(zhuǎn)錄起始及其發(fā)生的頻率是基因表達(dá)調(diào)控環(huán)節(jié)中最基本的。在已發(fā)現(xiàn)的眾多轉(zhuǎn)錄因子和其他基因調(diào)控蛋白中，DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域大多在100個氨基酸以下，具有不同的結(jié)構(gòu)模式，即如前所述的鋅指模式、alpha螺旋-轉(zhuǎn)角-alpha螺旋模式和亮氨酸拉鏈模式等等。

通過對受感染的人細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，皰疹病毒蛋白VP16可以結(jié)合于人的細(xì)胞增殖因子HCF。因此推測VP16在結(jié)構(gòu)上模仿了人亮氨酸拉鏈蛋白(LZIP)，因此它可以調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程。此外，在果蠅等生物中也發(fā)現(xiàn)，LZIP具有HCF結(jié)合功能，因此，LZIP-HCF的相互作用在后生動物進(jìn)化過程中是保守的。(Genes?Dev1997?Dec?1；11(23)：3122-7)

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人亮氨酸拉鏈蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人亮氨酸拉鏈蛋白9.13。

由于如上所述人亮氨酸拉鏈蛋白9.13蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人亮氨酸拉鏈蛋白9.13蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人亮氨酸拉鏈蛋白9.13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人亮氨酸拉鏈蛋白9.13以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人亮氨酸拉鏈蛋白9.13的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人亮氨酸拉鏈蛋白9.13的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人亮氨酸拉鏈蛋白9.13的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人亮氨酸拉鏈蛋白9.13的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人亮氨酸拉鏈蛋白9.13的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人亮氨酸拉鏈蛋白9.13異常相關(guān)的疾病的方法。