[發明專利]一種新的多肽——人蛋白內切酶16.61和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127336.1
• 申請日: 2000-11-10
• 公開（公告）號: CN1352298A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N15/57;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人蛋白內切酶16.61，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

蛋白內切酶Clp是一個蛋白二聚體，它包含一個水解蛋白的亞基(clpP)和兩個相關的ATP結合調控亞基(clpA和clpX)之一。ClpP是一個絲氨酸蛋白酶，具有與胰凝乳蛋白酶相似的活性。它的酶催化活性位點是絲氨酸-111和組氨酸-136，這兩個位點在不同來源的Clp酶中是高度保守的，可以用來鑒定某種蛋白是否屬于Clp蛋白。

其保守的堿基序列是：T-x(2)-[LIVMF]-G-x-A-[SAC]-S-[MSA]-[PAG]-[STA](其中S是酶催化活性位點)和R-x(3)-[EAP]-x(3)-[LIVMFYT]-M-[LIVM]-H-Q-P(其中H是酶催化活性位點)

Clp的活性與細胞的不同生長狀態有關。在對數生長期早期，Clp的活性較低，然而隨著細胞的生長Clp的活性快速的增強，在對數生長期后期和進入早期穩定期的細胞中活性最高，然后又恢復最初的活性。這種活性的變化與Clp的Clp?A組份活性有關，而與Clp?P和Clp?X的活性關系不大。蛋白內切酶Clp的功能是將蛋白切割成小的肽段，這一過程需要ATP與鎂離子的參與。在沒有ATP的情況下，只有短于5個殘基的寡聚肽段才會被切割。蛋白內切酶Clp的另一個功能是充當分子伴娘。它介導蛋白插入細胞膜結構的過程、蛋白復合物的解聚或齊聚化的過程。蛋白內切酶Clp還可以修復由于不良環境的壓力而被破壞的蛋白，以及活化Mu，λ以及P1?DNA復制所需的蛋白。這樣看來，蛋白內切酶Clp不但可以水解蛋白，同時還在蛋白修復中起重要作用。如果此蛋白的活性失常將使細胞的蛋白修復功能受到影響。如果調控細胞周期的關鍵蛋白受到損傷而不能及時修復，那么細胞將有可能無限制的分裂增殖，最終導致癌癥。

Clp蛋白對細胞的蛋白質平衡起重要的作用。蛋白水解酶的活性的降低會部分引起細胞中蛋白質濃度的升高會改變細胞的滲透壓，引起細胞形狀的改變，在泌尿系統中則引起各種泌尿系統的疾病，例如蛋白尿，血尿，水腫，尿毒癥等。通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人蛋白內切酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人蛋白內切酶1b.61。

由于如上所述人蛋白內切酶16.61蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人蛋白內切酶16.61蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人蛋白內切酶16.61蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人蛋白內切酶16.61以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蛋白內切酶16.61的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蛋白內切酶16.61的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人蛋白內切酶16.61的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人蛋白內切酶16.61的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人蛋白內切酶16.61的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人蛋白內切酶16.61異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中440-895位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2120位的序列。