[發(fā)明專利]一種新的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2－12.65和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00127255.1
• 申請日: 2000-11-06
• 公開（公告）號: CN1352119A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

纖溶酶原激活物抑制劑2是一種絲氨酸蛋白水解酶抑制物，在生物體內(nèi)通過抑制尿激酶及組織纖溶酶原活性物的作用活性來調(diào)控纖溶酶的形成。與其它的絲氨酸蛋白水解酶抑制物相似，纖溶酶原激活物抑制劑2以1∶1的比例與相應(yīng)的絲氨酸蛋白水解酶結(jié)合，以形成沒有活性的蛋白水解酶復(fù)合物，以抑制蛋白水解酶在體內(nèi)的作用活性[Richard?D.Ye，Shawn?M.Ahern?et?al.，1989，J?BiolChem，264：5495-5502]。

纖溶酶原是一種常見的絲氨酸蛋白水解酶，在生物體內(nèi)參與多種不同的生理學(xué)過程，包括血纖維蛋白溶解作用、組織重建、炎癥反應(yīng)及腫瘤轉(zhuǎn)移等。纖溶酶原激活物抑制劑2通過調(diào)控纖溶酶原的形成來參與調(diào)節(jié)上述各種重要的生理過程。在生物體內(nèi)，纖溶酶原激活物抑制劑2通常由周邊血單細胞的內(nèi)毒素及腫瘤細胞來刺激其表達與合成。纖溶酶原激活物抑制劑2的表達異常通常將導(dǎo)致生物體內(nèi)相應(yīng)的纖溶酶原的表達異常，從而影響如上所述的各種與之相關(guān)的生理學(xué)過程的異常。

研究發(fā)現(xiàn)，纖溶酶原激活物抑制劑2與雞的卵清蛋白非常相似，兩者在體內(nèi)的分泌均不需信號肽的存在，且均在母體受孕期間的子宮內(nèi)高表達，由兩者的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)活性的相似性，認為兩者在進化上亦存在著一定的相關(guān)性。1987年，Ye等人從人中克隆得到了一纖溶酶原激活物抑制劑2蛋白，該蛋白的氨基酸序列中含有三個潛在的N-糖基化位點，而其380位的精氨酸殘基位點和381位的蘇氨酸殘基位點是一典型的絲氨酸蛋白酶抑制作用中心[Ye?R.D.，Ahern?S.M.etal.，1989，J?Biol?Chem.，264：5495-502]。該蛋白在體內(nèi)的表達受多種細胞因子、激素及佛波酯類物質(zhì)的共同調(diào)節(jié)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人纖溶酶原激活物抑制劑2的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65。

由于如上所述人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人纖溶酶原激活物抑制劑2-12.65異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中1186-1533位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2287位的序列。