[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白9.35和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127232.2
• 申請日: 2000-11-06
• 公開（公告）號: CN1352103A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白9.35，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在許多蛋白中均發現含有鋅原子的結合結構域，這些蛋白在生物體內涉及蛋白與核酸、蛋白與蛋白間的相互作用。鋅結合蛋白通常作為轉錄因子及信號傳導分子參與基因的表達與調控，這類蛋白構成了一個很大的蛋白家族，被稱為鋅指蛋白。在人的基因組中約含有300到700個鋅指蛋白，這些鋅指蛋白在生物體內與核苷酸結合，發揮著許多重要的生物學功能，其最重要的作用就是調節基因的轉錄與表達。研究發現，鋅指蛋白在不同的生物的各種組織中均有表達，這些組織包括造血細胞、腦、神經系統、各種與腫瘤相關的組織和無限增殖細胞系組織等。其在這些組織的基因表達過程中均起著極為重要的作用。

鋅指蛋白的鋅指結構主要有以下幾種：C2H2構型、C2C2構型、C2HC構型、C2HC4C構型、C3H構型、C3HC4構型(Dai?KS?et?al.，1998)。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種構型的鋅指蛋白，其中含C2H2構型的鋅指蛋白基因構成人類基因組最大的一族基因(Berker?et?al.，1995)。C2H2型鋅指蛋白與基因的轉錄活化及抑制有關，這些蛋白的表達異常將引發各種發育紊亂性疾病、各種腫瘤的發生、各種遺傳性疾病及免疫系統疾病[KamalChowdhury，Heidi?Rohdewohld?et?al.，Nucleic?Acids?Research，1988，16：9995-10011]。

C2H2型鋅原子結合結構域最早在蛋白轉錄因子IIIA中被得到，是真核生物轉錄因子中分布最廣的DNA結合結構域。C2H2型鋅指蛋白的蛋白序列中均含有下列保守的序列特征：(Tyr，Phe)-X-Cys-X(2，4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3，5)-His(其中X表示任意氨基酸殘基；半胱氨酸與組氨酸與鋅原子形成配位鍵，結合鋅原子；其它三個保守的氨基酸殘基形成疏水性中心區域；其它變化的氨基酸殘基負責介導蛋白與其它分子的相互作用)。一個鋅指蛋白可能含有一個或多個鋅指結構域，這些結構域在生物體內獨立完成自己的生理學功能。在很多情況下，含有鋅指結構域的蛋白與特殊的雙鏈及單鏈DNA序列相互作用，起著轉錄調節因子的作用。現有研究發現，C2H2類型的鋅指結構域不僅在一些組織的基因表達過程中起重要的調節作用，其在發育調節過程亦起著非常關鍵的作用。

轉錄因子S-II(TFIIS)構成了一轉錄因子家族，其是一種真核蛋白，對RNA多聚酶II的轉錄延長是必需的。該轉錄因子只有在RNA聚合酶II存在時才顯示與DNA的結合活性。該蛋白約由300個氨基酸殘基組成，且其在哺乳動物、果蠅、酵母中均高度保守。該轉錄因子家族的成員均含有一高度保守的區域，這一保守區域含有四個半胱氨酸殘基與鋅離子結合并折疊成一鋅帶狀結構。除半胱氨酸外，這一保守區域還含有其它保守的氨基酸殘基，該保守區域由如下所示的一致性序列片段組成：C-X(2)-C-X(9)-[LIVMQSAR]-[QH]-[STQL]-[RA]-[SACR]-X-[DE]-[DET]-[PGSEA]-X(6)-C-X(2，5)-C-X(3)-[FW]；其中四個半胱氨酸殘基為鋅配鍵形成的位點。所有該蛋白家族的成員均含有這一保守的序列片段。該序列片段可能是蛋白與核苷酸序列結合的識別位點，是蛋白發揮正常調控作用的中心區域。該序列片段在體內通過調節蛋白與DNA的結合，來調節RNA聚合酶II的轉錄延伸，以調控著一些原癌基因及病毒的表達，包括人免疫缺陷型病毒HIV-1的表達[Qian?X，Jeon?C.et?al.，1993，Nature，365：277-279]。其表達異常將導致導致蛋白的作用異常，即一些基因在體內的異常增殖，其通常與生物體內一些免疫缺陷型疾病、各種腫瘤及癌癥等疾病的發生相關。

本發明的新的人蛋白，不僅含有上述兩種蛋白結構功能域，還含有一細胞增殖抑制蛋白所共有的結構域——MYND結構域。該結構域在生物體內與蛋白的鋅指結構域及TFIIS結構域協同作用，以調控一些基因的轉錄與表達及生物生長發育過程中細胞的增殖[LeBoeuf?RD，Ban?EM?et?al.，1998，J?Biol?Chem，273：361-368]。