[發明專利]一種新的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2－9.9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127230.6
• 申請日: 2000-11-06
• 公開（公告）號: CN1352101A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18;A61P9/10;A61P43/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

纖溶酶原激活物(PA)是激活纖溶物系統的絲氨酸蛋白水解酶。它們把非活性的纖溶酶原轉化為活性的纖溶酶，后者降解血纖蛋白及血纖蛋白原。在人體內有兩種纖溶酶原激活物，分別為組織纖溶酶原激活物(t-PA)以及與尿激酶相同的纖溶酶原激活物(u-PA)，u-PA由腎臟細胞與其他正常或惡性細胞產生。t-PA在防止血栓形成方面尤為重要。u-PA則防止尿道中血纖蛋白凝塊的形成，并能夠愈合創傷，在腫瘤性轉化生長中也發現有u-PA存在。

PA的濃度及活性除了由PA合成來調控以外，還由抑制劑調控。現已知兩種不抑制纖溶酶或其他蛋白水解酶的特異性纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)。一種由內皮細胞產生(PAI-1)，另一種在胎盤中發現(PAI-2)，也被稱為“minactivin”。

纖溶酶原激活物抑制劑2(PAI-2)，是一種對尿型以及組織型的纖溶酶原激活物特異的絲氨酸蛋白水解酶抑制劑(serpin)，這是一種主要的巨噬細胞蛋白并在單核細胞及巨噬細胞生理學中起重要作用。研究發現人類巨噬細胞淋巴瘤細胞株能夠由腫瘤啟動子乙酸肉豆蔻佛波醇誘發，隨后通過由類G蛋白分子激活磷脂酶C的信號來調節PAI-2基因轉錄暫時性增長50倍，從而強有效地刺激PAI-2的生物合成。因而巨噬細胞在一定條件下具有抑制纖溶酶原激活系統的功能主要是由PAI-2引起的。纖溶酶原激活物抑制劑2與腫瘤性轉化生長有關，PAI-2及其激動劑，抑制劑，拮抗劑可用于診斷，防治各種與腫瘤性轉化有關的疾病，例如巨噬細胞淋巴瘤，早幼粒細胞淋巴瘤等(Wolf?D.S.，Robert?L.M.，et.，Mol.Cell.Biol.，7：4564，1987)。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人纖溶酶原激活物抑制劑2的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9。

由于如上所述人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人纖溶酶原激活物抑制劑2-9.9異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中2101-2373位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2440位的序列。