[發明專利]一種新的多肽——人細胞凋亡相關蛋白12.32和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127139.3
• 申請日: 2000-11-02
• 公開（公告）號: CN1352054A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人細胞凋亡相關蛋白12.32，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

ProT-alpha蛋白廣泛地分布在哺乳動物細胞中，是一種小的(109-110個氨基酸殘基)、酸性的細胞核蛋白，與哺乳動物細胞的增殖和生存密切相關。ProT-alpha蛋白只存在于哺乳動物細胞中，而且能夠大量地表達，其結構基本不發生折疊，在所有的組織細胞中，它都以完整的形式定位于核中。ProT-alpha是一種高度酸性的蛋白，在以前它被認為是一種胸腺因子，在T淋巴細胞成熟過程中起著激素調節作用，然而，進一步的分子和細胞水平上的分析顯示它是一種核蛋白，是細胞增殖所必需的。ProT-alpha蛋白能夠改變染色質的濃縮狀態，通過它與His1的共同作用介導染色質絲形成非折疊狀態。另外，ProT-alpha蛋白還發現與細胞的凋亡有關，是細胞死亡和腫瘤生長的調節器(Segade?F，Gomez-Marquez?J，1999)。

當靜止細胞增殖時，ProT-alpha的mRNA的量增加到其原來水平的10倍以上，接著產生ProT-alpha蛋白，它的表達與其它的細胞生長相關分子(如Myc、His?H3和增殖細胞的核抗原)在時序上是相伴隨的。最引人注目的證明來自同步的人類骨髓瘤細胞，它一旦暴露到反義寡聚脫氧核苷酸，在一些位點上直接靠近ProT-alpha的mRNA，緊接著生長受到限制。在體外，ProT-alpha蛋白能夠結合到人免疫缺陷病毒蛋白rev和人T細胞白血病蛋白rex的活性區域(Kubota?et?al.)，rev涉及將不完全切割的病毒RNA從細胞核的輸出，因此ProT-alpha可能與正常細胞中的rev類似蛋白相互作用，協助哺乳動物細胞的RNA或者蛋白從細胞核中的輸出。

ProT-alpha是一種很小的蛋白，其的氨基酸序列是比較獨特的，除了一個在其它的核蛋白中也存在的較為典型的核定位信號以外，它還含有一個含有重復Glu殘基區域，也能夠在Xenopus染色質改造蛋白(一種核質蛋白)中找到。在ProT-alpha上，發現有若個tRNA附著位點，因此tRNA與它的結合是選擇性可變更的。ProT-alpha蛋白與核質蛋白有很明顯的同源性，在體外它們都能夠與His相互作用(Papamarcaki，T.and?Tsolas，O.，1994；Diaz-Jullien，C.，Pérez-Estévez，A.et?al.，1996)。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與細胞凋亡相關蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人細胞凋亡相關蛋白12.32。

由于如上所述人細胞凋亡相關蛋白12.32蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人細胞凋亡相關蛋白12.32蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人細胞凋亡相關蛋白12.32蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人細胞凋亡相關蛋白12.32以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人細胞凋亡相關蛋白12.32的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人細胞凋亡相關蛋白12.32的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人細胞凋亡相關蛋白12.32的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人細胞凋亡相關蛋白12.32的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人細胞凋亡相關蛋白12.32的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人細胞凋亡相關蛋白12.32異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；