[發(fā)明專利]一種新的多肽——人熱休克蛋白9.24和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00127123.7
• 申請日: 2000-11-02
• 公開（公告）號: CN1352045A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人熱休克蛋白9.24，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白前體在跨膜運送前需要從折疊狀態(tài)變?yōu)榻庹郫B狀態(tài)，形成松散結(jié)構(gòu)以利于跨膜運送，跨膜后，解折疊狀態(tài)需重新卷曲折疊為成熟的蛋白質(zhì)分子。現(xiàn)認(rèn)為跨膜運送的蛋白質(zhì)在解折疊和重新折疊過程中都可能有一類被稱為“分子伴侶”的分子參與。分子伴侶的絕大部分屬于熱休克蛋白。分子伴侶有解折疊酶的功能，并且可以利用ATP水解所釋放的能量參與蛋白質(zhì)跨膜運送后的分子重新折疊和組裝過程。(細(xì)胞生物學(xué)??汪??仁等主編??北京師范大學(xué)出版社)

在生物體內(nèi)，熱休克蛋白的基本功能還包括，選擇性的與畸形的蛋白質(zhì)及其聚合物結(jié)合，利用水解ATP所釋放的能量使聚集的蛋白質(zhì)溶解并進一步折疊成具有正確構(gòu)象的蛋白質(zhì)。(細(xì)胞生物學(xué)??翟中和主編??高等教育出版社pp112)生物體內(nèi)，對幫助變性或錯誤折疊蛋白重新折疊形成正常分子，主要是通過熱休克蛋白來完成的。(細(xì)胞生物學(xué)??汪坤仁等主編??北京師范大學(xué)出版社)

DnaJ是一個熱休克蛋白家族，在包括人的很多生物體內(nèi)都克隆到了編碼DnaJ蛋白的基因。在對大腸桿菌DnaJ蛋白的研究發(fā)現(xiàn)，DnaJ和DnaK共同作用起到分子伴侶的功能。此功能的核心是DnaJ與DnaK相互作用，共同刺激ATP酶的活性。實驗結(jié)果證明，DnaJ的胺基末端的高度保守序列，也稱J結(jié)構(gòu)域，在ATP酶的活化、lambda-DNA的復(fù)制過程中是充分且必要的。這一結(jié)論可推廣至真核生物。(J?Biol?Chem?1994?Feb?18；269(7)：5446-51)

最新的進展顯示，已從人的纖維肉瘤cDNA文庫中克隆到了編碼DnaJ類似蛋白的基因，它編碼的蛋白有397個氨基酸殘基，有DnaJ所具有的N-末端J結(jié)構(gòu)域，有四重復(fù)的Cys-X-X-Cys-X-Gly-X-Gly結(jié)構(gòu)域(這是DnaJ家族特有的結(jié)構(gòu))。(Biochem?Biophys?Acta??1993?Jul?18；1174(1)：114-6)

逆轉(zhuǎn)錄PCR的結(jié)果表明，DnaJ的mRNA在人的各種組織中均有表達(dá)，編碼DnaJ的基因被定位于人染色體組的15q25位置。(J?Hum?Genet?1999；44(3)：185-9)DnaJ蛋白除了具有一般的熱休克蛋白功能以外，根據(jù)研究還發(fā)現(xiàn)了很多特殊功能。

遺傳學(xué)的研究表明，真核生物的DnaJ蛋白可以調(diào)節(jié)lacZ操縱子調(diào)控的激素受體的活性，DnaJ蛋白在激素的信號傳導(dǎo)、調(diào)控類固醇激素受體活性等過程中有重要作用。(J?Biol?Chem?1995?May?10；270(10)：5251-7)

除了已公認(rèn)的DnaA、DnaJB、DnaC等以外，DnaJ和RepA共同形成復(fù)合物，與DnaK，GrpE一同在質(zhì)粒起源的噬菌體P1的體外復(fù)制過程中起作用。(Proc?NatlAcad?Sci?U?S?A?1990?Apr；87(7)：2?690-4)

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與熱休克蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人熱休克蛋白9.24。

由于如上所述人熱休克蛋白9.24蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人熱休克蛋白9.24蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人熱休克蛋白9.24蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人熱休克蛋白9.24以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人熱休克蛋白9.24的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人熱休克蛋白9.24的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人熱休克蛋白9.24的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人熱休克蛋白9.24的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人熱休克蛋白9.24的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人熱休克蛋白9.24異常相關(guān)的疾病的方法。