[發明專利]一種新的多肽——核糖體蛋白L299.13和編碼這種多肽的多核苷酸無效

申請號：	00125830.3	申請日：	2000-10-26
公開（公告）號：	CN1351062A	公開（公告）日：	2002-05-29
發明（設計）人：	毛裕民;謝毅	申請（專利權）人：	上海博德基因開發有限公司
主分類號：	C07K14/435	分類號：	C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種多肽核糖體蛋白 l299 13 編碼這種多核苷酸
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【說明書】：

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述于一種新的多肽——核糖體蛋白L299.13，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

核糖體是合成蛋白質的細胞器，其唯一的功能是按照mRNA的指令由氨基酸合成多肽鏈。在核糖體的大小亞基上分布著許多蛋白質，在不同原核生物或真核生物中這些蛋白質都是高度保守的，并且行使著較為復雜的功能。同時對真核生物和原核生物核糖體蛋白進行分析，找到一些序列上的相似區域，這就表明了在生物體進化過程中，核糖體蛋白是較為保守的(Tanaka，T.，Wool，I.G.，andStoffler，G.，1980)。真核生物核糖體含有多于70種的蛋白質，這些蛋白質的性質基本相同，當從核糖體分離時，它們趨于沉淀下來，某些則可以在核糖體純化中丟失。雖然核糖體結構功能非常復雜，但目前一部分核糖體蛋白的一些特性已經得到了闡述。

核糖體蛋白L29位于核糖體的大亞基上，其結構包含了多聚A尾巴(長為600bp)，最大的開放閱讀框從核苷酸30的ATG密碼子開始，到507位的TAG終止密碼子處結束。起始密碼子出現在GACATGG中，與RCCATGG(R代表嘌呤)序列一致(Kozak，M.，1986)。過轉錄分裂和多聚腺嘌呤信號(AATAAA)出現在613-618位置處。對于調節核糖體蛋白的mRNA翻譯(Perry，R.P.and?Meyuhas，O.，1990)起著重要的作用的5’末端嘧啶序列在rpL29中卻沒有找到。

在核苷酸水平上，人的rpL29的cDNA與鼠的rpL29有77.4％的相同性包含一個開放閱讀框，編碼一條含有159個氨基酸殘基的蛋白。人的rpL29蛋白的前面64個殘基與鼠的相應蛋白100％相同，前面的107個殘基有97％的相同，表明了其N末端區域的重要功能。但是在C末端，末尾50個殘基的相似性卻只有57.4％。同源性相對較低的區域發現有許多的帶電性氨基酸，基礎氨基酸的含量在人和鼠中相當(各為13和12)，因此在功能上也有一定程度的保守性，其功能與高含量的帶電氨基酸相關。Southern?blot分析證明，人的rpL29基因并不僅僅存在單一的功能拷貝，其拷貝數接近于10，這與其它的一些核糖體蛋白相一致，它們都是特異性多拷貝基因。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與核糖體蛋白L的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為核糖體蛋白L299.13。

由于如上所述核糖體蛋白L299.13蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的核糖體蛋白L299.13蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新核糖體蛋白L299.13蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——核糖體蛋白L299.13以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼核糖體蛋白L299.13的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼核糖體蛋白L299.13的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產核糖體蛋白L299.13的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——核糖體蛋白L299.13的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——核糖體蛋白L299.13的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與核糖體蛋白L299.13異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；