[發(fā)明專利]一種新的多肽——Kringle蛋白59.62和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00125814.1
• 申請日: 2000-10-26
• 公開（公告）號: CN1351052A
• 公開（公告）日: 2002-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——Kringle蛋白59.62，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

Kringle是一種特殊的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)，最初在人的凝血素中發(fā)現(xiàn)，后發(fā)現(xiàn)以不同拷貝存在于人的血纖維蛋白酶原、組織纖維蛋白酶原激活因子、尿激酶、載脂蛋白A等蛋白中。這些Kringle有相同的起源，在進化過程中為了適應(yīng)不同的功能，因而產(chǎn)生了各不相同的分化，但在總的結(jié)構(gòu)上保持相似。每個Kringle是結(jié)構(gòu)上獨立的單位，以二硫鍵橋交叉結(jié)合形成結(jié)構(gòu)域。

Kringle既可以單拷貝的形式存在又可以多拷貝的形式存在，比如在載脂蛋白A中就有高達38個拷貝，而在凝血因子XII中僅有一個拷貝，通常多個拷貝的Kringle之間形成一系列小的串聯(lián)結(jié)構(gòu)。對多種Kringle的二級結(jié)構(gòu)進行分析比較，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)域中呈現(xiàn)較多的β-折疊，而α-螺旋結(jié)構(gòu)卻很少。在多種蛋白的Kringle序列中，有一段較為保守的氨基酸結(jié)構(gòu)：[Phe-Tyr]-Cys-Arg-Asn-Pro-[Asp-Asn-Arg]。

在各種含有Kringle結(jié)構(gòu)的蛋白中，Kringle的構(gòu)象并不完全相同，因而在功能特性上也產(chǎn)生了差異，許多功能上的差異是由于某些氨基酸的變更引起的。Kringle區(qū)域起著蛋白質(zhì)之間的結(jié)合介質(zhì)的作用，結(jié)合諸如膜、其它蛋白質(zhì)或磷脂等，并且也有調(diào)節(jié)蛋白水解活性的功能。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胎腦、原液培養(yǎng)的L02細胞株、0.5％FBS培養(yǎng)液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發(fā)明的多肽的表達譜與Kringle蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為Kringle蛋白59.62。

由于如上所述Kringle蛋白59.62蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的Kringle蛋白59.62蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新Kringle蛋白59.62蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——Kringle蛋白59.62以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼Kringle蛋白59.62的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼Kringle蛋白59.62的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)Kringle蛋白59.62的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——Kringle蛋白59.62的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——Kringle蛋白59.62的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與Kringle蛋白59.62異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中7-1635位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-3013位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制Kringle蛋白59.62蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。