[發明專利]一種新的多肽——人FD16.06和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125785.4
• 申請日: 2000-10-26
• 公開（公告）號: CN1351034A
• 公開（公告）日: 2002-05-29
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人FD16.06，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

肝細胞核因子3/fork?head(HNF/fkh)結構域是一進化上保守的DNA結合基序。從酵母到哺乳動物的所有真核生物的許多轉錄因子中均含有該結構基序。這些轉錄因子在胚胎發育過程中起著重要的作用，維持著細胞分化的狀態及原癌基因的表達。1996年，Kaufmann等已從Xenopus?laevis中克隆得到了14個編碼fork?head相似蛋白的不同的基因XFD1-10、XFLIP、XFKH4及XFKH5；同年，Chen等還克隆得到了編碼FAST-1蛋白的基因；1998年，Manfred?Koster等人又從Xenopus?laevis中克隆得到了編碼XFD-11蛋白的基因，該基因也含有進化上保守的fork?head/HNF-3結構域，其為肝細胞核因子3/forkhead(HNF/fkh)蛋白家族[Manfred?Koster，Karin?Dillinger?et?al.，Mech.Dev.，1998，76：169-173]

肝細胞核因子3/fork?head(HNF/fkh)蛋白家族在生物體內分布非常廣泛，該家族的成員均含有一由84-105個氨基酸殘基組成的長度不等的特征性結構域---HNF/fkh結構域。HNF/fkh蛋白家族成員按其結構域原始序列的不同又可分為幾個不同的亞類，不同亞類的家族成員除DNA結合結構域高度保守外，其余區域均沒有明顯的相似性(Chuan?li，Philip?W.Tucker；Proc.Natl.Acad.Sci.USA?1993，90：11583-11587)。HNF/fkh結構域為DNA蛋白結合結構域中的一種，其在生物體內主要參與與特定的DNA序列結合以調控各種不同基因的表達，并使其發揮正常的生物學功能。研究發現，HNF/fkh蛋白家族的成員在生物體內具有許多重要的生物學功能，其與胚胎發育、細胞分化和增殖、各種器官形成、愛滋病等免役缺陷型疾病、冠心病、各種肝臟疾病及各種腫瘤、癌癥的發生均有一定的關系(DaSliva?L，Kirken?RA?et?al.，Gene?1998?22：135-142；FrankS，Zoll?B；DNA?Cell?Biol?1998?17：679-88)。

HNF/fkh結構域由10個獨立的結構單位組成。其N末端有一鉤狀結構，后跟兩個親水性螺旋結構。這兩個螺旋結構被一轉角結構分開，既DNA結合結構域花式結構中的α螺旋-轉角-α螺旋結構。其中，螺旋結構中幾個保守的氨基酸殘基形成了兩個疏水性中心，這兩個疏水性區域與蛋白間相互作用及HNF/fkh結構域的穩定性有關。第二個α螺旋中唯一的T23殘基為CK-2激酶的識別位點，這一位點的磷酸化與去磷酸化可能直接影響DNA的結合活性及HNF/fkh結構域二級結構的形成。同時，這一α螺旋還被證實為一識別螺旋，與DNA的識別及結合有關，其外側面是蛋白與DNA結合專一性的主要決定因素；該花式結構后接一個芳香族殘基及第三個親水性螺旋結構，形成了結構域的中心部分；在結構域的C末端含有兩個長度可變的loop結構，其兩側由七個氨基酸殘基組成的螺旋后接一短核苷酸鏈組成。這一C末端的短核苷酸鏈是結構域與DNA相互作用的區域，這一結構域中的鉤狀結構可能直接參與蛋白與DNA的相互作用(Chuanli，Philip?W.Tucker；Proc.Natl.Acad.Sci.USA?1993，90：11583-11587)。由上可知，該結構域在轉錄因子與特定DNA序列相互作用，調節各種基因的表達過程中起著重要的作用。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與人FD的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人FD16.06。

由于如上所述人FD16.06蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人FD16.06蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人FD16.06蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人FD16.06以及其片段、類似物和衍生物。