[發明專利]一種新的多肽——核苷酸還原酶16.83和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125655.6
• 申請日: 2000-10-11
• 公開（公告）號: CN1347989A
• 公開（公告）日: 2002-05-08
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——核苷酸還原酶16.83，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在哺乳動物組織和微生物中，脫氧核苷酸都是由相應的核苷酸通過以氫替代2’-OH基團而形成的。催化這種核苷酸還原的有兩種類型的核糖核苷酸還原酶。在自然界廣泛分布并存在于哺乳動物細胞中的一類酶含有非正鐵血紅素，其由一種以上的多肽鏈組成，對二磷酸(ADP、GDP、CDP及UDP)還原作用具有專一性。而第二種酶局限于某些微生物中，這類酶只含有一種多肽鏈，但在某些情況下形成寡聚物。

核苷酸還原酶在生物體內催化脫氧核糖核苷酸的還原合成，其提供了DNA合成所必需的前體。在哺乳動物細胞中，核苷酸還原酶是一種多聚酶，由一個大的亞單位(約由700-1000個氨基酸殘基組成)和一個小的亞單位(約由300-400個氨基酸殘基組成)所組成。

小的亞單位在生物體內與兩個鐵離子結合(蛋白氨基酸序列中的谷氨酸、天冬酰胺及兩個組氨酸均參與金屬離子的結合)，且在該亞單位中還含有以活性酪氨酸位點。在原核生物、真核生物及病毒中均含有這種類型核苷酸還原酶，且它們的小亞單位均含有金屬離子結合殘基和活性酪氨酸位點[Peter?Reichard，1993，Science，260：1773-1776]。

研究發現，所有上述的核苷酸還原酶均含有如下所示的保守的一致性序列片段：[LIVMSEQ]-E-X(1，2)-[LIVTA]-[HY]-[GSA]-X-[STAVM]-Y-X(2)-[LIVMQ]-X(3)-[LIFY]-[IVFYCSA]；該序列片段是還原酶與鐵離子結合，發揮其還原功能的活性位點。該序列中的E、H即為酶與鐵離子的結合位點，而Y是酶活性位點氨基酸殘基。該序列的突變，可能會導致酶活性的喪失，從而影響脫氧核糖核苷酸的合成，進而影響整個生物體遺傳信息載體DNA的合成。由此可見，該蛋白在生物體內有著及其重要的作用，其從一級水平調節著生物體遺傳信息的表達，該蛋白的表達異常通常與一些發育紊亂癥、代謝紊亂癥等疾病的發生密切相關。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與核苷酸還原酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為核苷酸還原酶16.83。

由于如上所述核苷酸還原酶16.83蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的核苷酸還原酶16.83蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新核苷酸還原酶16.83蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

?本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——核苷酸還原酶16.83以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼核苷酸還原酶16.83的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼核苷酸還原酶16.83的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產核苷酸還原酶16.83的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——核苷酸還原酶16.83的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——核苷酸還原酶16.83的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與核苷酸還原酶16.83異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中1165-1626位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1812位的序列。