[發明專利]一種新的多肽——信號肽酶9.35和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125640.8
• 申請日: 2000-10-11
• 公開（公告）號: CN1348001A
• 公開（公告）日: 2002-05-08
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N15/57;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——信號肽酶9.35，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

信號肽酶是一種將信號肽從分泌蛋白上切除的一種多肽。在原核生物中，有三種類型的信號肽酶：lepB基因編碼類型I信號肽酶，該類型信號肽酶負責大多數輸出前蛋白的加工過程：lsp基因編碼類型II信號肽酶，它只加工脂蛋白，第三種類型的信號肽酶加工毛亞基。

信號肽酶I是一種整合膜蛋白，它依靠一個或兩個N端轉膜結構域錨定于細胞質膜，同時其蛋白的主要部分則定位于璧膜間隙。一個絲氨酸和一個賴氨酸是信號肽酶催化反應所必須的兩個氨基酸殘基(Sung?M.etal.，J.Biol.；Chem.267：13154-13159)。

信號肽酶I在進化上與酵母線粒體內膜蛋白水解酶亞基1和亞基2有關。酵母線粒體內膜蛋白水解酶亞基1和亞基2催化信號肽的解離，這些信號肽引導分泌蛋白從線粒體基體穿過內膜，到達內膜空間(Nunnari?J.etal.，Science.262：1997-2004)。

在真核生物中，信號肽的解離受一個寡聚酶復合體的影響。這個寡聚酶復合體至少由5個亞基組成，這5個亞基組成信號肽酶復合體(SPC)。SPC定位于內質網膜。哺乳動物SPC的兩個組成成分，SPC18和SPC21亞基以及酵母SEC11亞基都有一個共同的區域與原核生物信號肽酶I和酵母IMP1/IMP2相似。

信號肽酶I和IMP1/2共同組成的家族蛋白有三個共同特征。第一個特征是可能的絲氨酸激活位點；第二個特征是可能的賴氨酸的激活位點，這個激活位點在SPC亞基中并不是保守的；第三個特征是位于C末端的目前還不知道其生物學意義的但在信號肽酶I家族所有蛋白中都保守的區域。

信號肽酶I和IMP1/2共同組成的家族蛋白有對應于以上三個共同特征有以下三個共同序列：1.[GS]-X-S-M-X-[PS]-[AT]-[LF]其中，S是一個氨基酸殘基的激活位點；2.K-R-[LIVMSTA](2)-G-X-[PG]-G-[DE]-X-[LIVM]-X-[LIVMFY]其中，K是一個氨基酸殘基的激活位點，但IMP2不含該序列；3.[LIV?MFYW](2)-X-(2)-G-D-[NH]-X(3)-[SND]-X(2)-[SG]。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與信號肽酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為信號肽酶9.35。

由于如上所述信號肽酶9.35蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的信號肽酶9.35蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新信號肽酶9.35蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——信號肽酶9.35以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼信號肽酶9.35的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼信號肽酶9.35的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產信號肽酶9.35的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——信號肽酶9.35的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——信號肽酶9.35的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與信號肽酶9.35異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。