[發(fā)明專利]一種新的多肽——人肽鏈內(nèi)切酶8.8和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00125579.7
• 申請日: 2000-09-29
• 公開（公告）號: CN1345977A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N9/48;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人肽鏈內(nèi)切酶8.8，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

肽鏈內(nèi)切酶Clp能夠裂解許多蛋白的肽鏈，在其裂解過程中需要ATP的水解(Maurizi?M.R.，Clark?W.P.，1990；Gottesman?S.，Maurizi?M.R.，1992)。肽鏈內(nèi)切酶Clp是一種二聚物蛋白，包含蛋白水解亞基(基因clpP)和兩種相關(guān)的ATP結(jié)合調(diào)節(jié)亞基(基因clpA和clpX)的任何一個。ClpP是一種Ser蛋白酶，具有與凝乳蛋白酶相似的活性，它的催化活性是由一種負電傳遞系統(tǒng)提供的，該負電傳遞系統(tǒng)與Ser蛋白酶胰島素家族相似，但是它的進化過程屬于獨立的收斂進化。

與ClpP蛋白酶高度相似的蛋白酶已經(jīng)在植物的葉綠體和其它的真核生物基因組中找到。涉及到催化三聯(lián)的兩個殘基及其附近區(qū)域的序列高度保守。ClpP的主要結(jié)構(gòu)上活性位點Ser和His殘基以及它們附近序列在葉綠體的Clp類似蛋白中都是非常保守的，但是與其它的Ser蛋白酶中相應(yīng)區(qū)域有所不同。除了個別生物的酶以外，肽鏈內(nèi)切酶Clp序列中最為保守的序列如下：(1)T-x(2)-[LIVMF]-G-x-A-[SAC]-S-[MSA]-[PAG]-[STA](其中S為活性位點殘基)；(2)R-x(3)-[EAP]-x(3)-[LIVMFYT]-M-[LIVM]-H-Q-P(其中H為活性位點殘基)。

Clp蛋白酶分裂蛋白(如酪蛋白和清蛋白)需要ClpP和相關(guān)的ATP結(jié)合調(diào)節(jié)亞基(基因clpA或clpX)，還需要ATP的連續(xù)水解。然而，在ClpA不存在的情況下，單獨的ClpP顯示限制的肽酶活性(Woo，K.M.，Chung，W.J.etal.，1989)，也即ClpP具有非常低的天然活性。實驗表明，單獨的ClpP能夠催化短肽內(nèi)生蛋白的分裂，如ClpP對于氧化的胰島素的分裂，該過程中觀察到的ClpA和ATP含量僅為1-2％。因此可以推斷，ClpP擁有催化肽鍵斷裂所必不可少的主要結(jié)構(gòu)，其它的基團起到了輔助的作用。ClpP能夠在二異丙基熒光磷酸的作用下失活，證明了ClpP是一種Ser蛋白酶。ClpP的開放閱讀框并不包含任何與胰蛋白酶類似的或者枯草桿菌蛋白酶類似的蛋白酶。

根據(jù)氨基酸同源比較的結(jié)果，本發(fā)明的多肽與上述的肽鏈內(nèi)切酶Clp在活性位點區(qū)域結(jié)構(gòu)相似，并且包含了肽鏈內(nèi)切酶Clp活性位點特征性的保守序列，因此認為此蛋白是一種新的肽鏈內(nèi)切酶，具有與之相似的生物學(xué)功能，并命名為人肽鏈內(nèi)切酶8.8。

由于如上所述人肽鏈內(nèi)切酶8.8蛋白在機體內(nèi)重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人肽鏈內(nèi)切酶8.8蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人肽鏈內(nèi)切酶8.8蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人肽鏈內(nèi)切酶8.8以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人肽鏈內(nèi)切酶8.8的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人肽鏈內(nèi)切酶8.8的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人肽鏈內(nèi)切酶8.8的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人肽鏈內(nèi)切酶8.8的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人肽鏈內(nèi)切酶8.8的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人肽鏈內(nèi)切酶8.8異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。