[發明專利]一種新的多肽——人結合蛋白RanBP67.43和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125571.1
• 申請日: 2000-09-29
• 公開（公告）號: CN1345861A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人結合蛋白RanBP67.43，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

RanBP蛋白是一些巨大的核孔蛋白，它們主要功能是結合Ran/TC4蛋白。Ran/TC4蛋白是一種小的核G蛋白，能夠與染色質束縛的鳥苷酸核苷釋放因子RCC1形成混合物。RCC1的缺失引起細胞周期、RNA輸送和核蛋白進出等過程的異常變更。Ran/TC4的超表達能夠遏制上述某些細胞過程的進行，表明Ran/TC4的功能是在RCC1功能發揮的之后才發生。

通過雙雜交篩選的方法能夠得到與Ran/TC4結合的蛋白，RanBP2蛋白就是其中之一，它包含有3224個氨基酸殘基，是一個非常巨大的蛋白。Ran/BP2的氨基末端包含了一個含有7個Leu的Leu富含區域、四個與RanBP1同源的區域、八個與NUP153相似的鋅指結構區域，其羧基末端與親環蛋白有高度的同源性。RanBP2包含了XFXFG的五肽結構域，具有核孔蛋白混合物(nuclear?pore?complex，NPC)的典型特征，這就表明了RanBP2是NPC的成員之一。并且，NLS介導的核輸送能夠被一種直接與RanBP2結合的抗體抑制，表明了RanBP2在NPC中起著非常重要的物質運輸功能。在Leu富含區域，有7個連續出現的Leu，構成一段Leu拉鏈(Leucine?zipper?region)，位于第450-471位置上。RanBP2的鋅指重復結構與NUPl53相同源。

Ran/BP2位于NPC上，對于核的物質運輸是必不可少的。通過免疫沉淀實驗，發現Ran/TC4-GTP結合RanBP2，并與一個抗RanBP2的抗體結合。RanBP2的序列上有四個區域與RanBP1高度同源，將每個區域單獨在大腸桿菌中表達，發現四個區域與Ran/TC4-GTP都能發生特異性結合，因而無論在功能上還是在序列相同性上它們都是Ran結合區域(RanBD)。在體內，這些RanBD可能協同起作用。RanBP2有26拷貝退化的XFXFG區域，可以作為是否是NPC蛋白的判斷依據。用Mab350進行免疫沉淀，發現RanBP2是核孔蛋白中最大的一種。

1997年，Dirk等人又從人中克隆得到了兩個新的RanGTP結合蛋白---RanBP7及RanBP8。這兩個蛋白與上述RanBP2蛋白具有相似的結構及功能特征，其亦在細胞周期和RNA及核蛋白的運輸過程中發揮重要的調控作用[Dirk?Gorlich，Marylena?Dabrowskiet?al.，1997，J?Cell?Biol，138(1)：65-80]。該蛋白的突變或表達異常將導致體內相關細胞周期途徑的異常，進而引發各種相關的代謝及發育紊亂性疾病。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與人結合蛋白RanBP的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人結合蛋白RanBP67.43。

由于如上所述人結合蛋白RanBP67.43蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人結合蛋白RanBP67.43蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人結合蛋白RanBP67.43蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人結合蛋白RanBP67.43以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人結合蛋白RanBP67.43的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人結合蛋白RanBP67.43的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人結合蛋白RanBP67.43的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人結合蛋白RanBP67.43的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人結合蛋白RanBP67.43的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人結合蛋白RanBP67.43異常相關的疾病的方法。