[發明專利]一種新的多肽——人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125517.7
• 申請日: 2000-09-29
• 公開（公告）號: CN1345959A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

磷酸核糖基轉移酶的功能是催化堿基和5-磷酸核糖基-alpha-1-焦磷酸酯(PRPP)合成核苷酸，這些酶和PRPP合酶有一個同源的含有13個氨基酸殘基的序列，此序列被證明是PRPP的結合位點[Biochemistry?1999?Mar?16；38(11)：3327-34]。

不同的磷酸核糖基轉移酶在PRPP的序列上有微小的差異，尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶(UPRTase)在其他磷酸核糖基轉移酶、PRPP合酶中天冬氨酸的位置是一個脯氨酸(Pro?131?in?the?E.coli?UPRTase)。為了證明此脯氨酸的功能，將131位脯氨酸突變為天冬氨酸的突變型蛋白與野生型蛋白的功能進行比較，結果是，突變后蛋白的轉化數(kcat)比野生型要降低50-60倍，尿嘧啶的米氏指數KM提高了100倍，而PRPP的米氏常數降低了很多倍，總體來講，突變并沒有影響尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶與PRPP的結合。因此，我們認為，脯氨酸的突變對PRPP的結合活性沒有重要影響，但對尿嘧啶結合于酶復合物和催化速率有重要作用。

在很多生物和細菌中均已克隆到了尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶，它們的結構和表達的研究工作也已完成[Mol?Biochem?Parasitol?1997?Aug；87(2)：137-44]。盡管尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶的活性與RNA識別之間的關系還不是很清楚，但根據對尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶結構的研究，我們可以推斷，尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶通過與RNA的結合可以調控轉錄和表達[Structure?1998?Mar15；6(3)：337-50]。

根據研究，尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶的最佳反應條件為PH6.4，95℃，GTP可以活化尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶。尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶是一個別構酶，能被嘌呤核苷酸激活，被嘧啶核苷酸所抑制[Biochem?Biophys?Acta?1996?Aug15；1296(1)：16-22]。研究發現，大腸桿菌中GTP和dGTP對尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶有激活作用，在真核生物中，這一點還未得到肯定。但我們可以推測，在人體細胞內，尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶也應可被GTP所活化[Int?JParasitol?1995?Feb：25(2)：207-14]。

人們已從多種不同的生物體內克隆得到了多種不同來源的尿嘧啶磷酸核糖轉移酶。本發明的新的多肽與已知的人尿嘧啶磷酸核糖轉移酶在蛋白水平上有100％的同一性和100％的相似性，其是一種新的人尿嘧啶核酸核糖轉移酶，命名為人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99。該蛋白與已知的各種尿嘧啶磷酸核糖轉移酶具有相似的生物學功能，其突變或表達異常通常與各種相關的發育及代謝紊亂性疾病等的發生密切相關，其還可用于診斷及治療上述各種疾病。

命名：人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99

由于如上所述人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人尿嘧啶磷酸核糖基轉移酶33.99異常相關的疾病的方法。