[發(fā)明專利]一種新的多肽——固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00125438.3
• 申請日: 2000-09-26
• 公開（公告）號: CN1345747A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

哺乳動物細(xì)胞中，膽固醇的代謝平衡是通過抑制其合成途徑中的低密度脂蛋白受體及其酶類基因的轉(zhuǎn)錄而實現(xiàn)的，固醇調(diào)節(jié)因子(SRE)是該抑制所必需的。一種DNA結(jié)合蛋白——鋅指蛋白與該調(diào)節(jié)因子的8個保守核苷酸以序列特異性及單鏈特異性相結(jié)合，這種蛋白質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)核酸結(jié)合蛋白(CNBP)。

CNBP是一種單鏈DNA結(jié)合蛋白，特異地和GTGCGGTG序列(存在與低密度脂蛋白及HMG-CoA合成酶中)結(jié)合。其cDNA由1.5kb組成，其5′端有一個開放閱讀框，103-105處的ATG作為起始密碼子，其mRNA的3′端有一個870nt組成的非編碼區(qū)，其蛋白產(chǎn)物由177個氨基酸組成，分子量約為20Kda，具有7個由14個氨基酸組成的重復(fù)，每個重復(fù)的結(jié)構(gòu)都與鋅指蛋白類似。鋅指蛋白是編碼鋅離子介導(dǎo)的核苷酸結(jié)合蛋白多基因家族中的成員，鋅指蛋白的鋅指結(jié)構(gòu)主要有以下幾種：C2H2、C2C2、C2HC、C2HC4C、C3H、C3HC4。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種類型的鋅指蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，這些蛋白與基因的轉(zhuǎn)錄活化及抑制有關(guān)，這些蛋白的表達異常將引發(fā)各種發(fā)育紊亂性疾病、各種腫瘤的發(fā)生、各種遺傳性疾病及免疫系統(tǒng)疾病[KamalChowdhury，Heidi?Rohdewohld?et?al.，Nucleic?Acids?Research，1988，16：9995-10011]。CNBP具有下列鋅指一致序列：CYXCGX₂GHXAX₂C，屬于鋅指蛋白Cys/Cys-His/Cys亞家族。[Tripathi?B.Rajavashisth，Science，1989，245(4918)：640-643]

細(xì)胞內(nèi)核酸結(jié)合蛋白廣泛分布于各種生物體組織中，在睪丸和腎上腺中含量最高，固醇能提高其活性。該蛋白在固醇介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄控制中有重要作用。它是一種單鏈DNA結(jié)合蛋白，在真核生物DNA復(fù)制、結(jié)合及修復(fù)中亦有重要作用。若發(fā)生異常，會影響膽固醇的正常代謝、破壞DNA的復(fù)制等正常的生命活動，導(dǎo)致各種疾病，

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胎腦、原液培養(yǎng)的L02細(xì)胞株、0.5％FBS培養(yǎng)液37.C饑餓的L02細(xì)胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發(fā)明的多肽的表達譜與固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43。

由于如上所述固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與固醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合的鋅指蛋白12.43異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；