[發明專利]一種新的多肽——氮源調節蛋白P－II－8.8和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125269.0
• 申請日: 2000-09-19
• 公開（公告）號: CN1343686A
• 公開（公告）日: 2002-04-10
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P43/00
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——氮源調節蛋白P-II-8.8，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

氮源調節蛋白P-II是一種細菌蛋白，對于Glu合成酶的控制起著非常重要的作用(Magasanik?B.，1989；Holtel?A.，Merrick?M.，1988；Cheah?E.，Carr?P.D.，1994)。在氮源限制的情況下，當Glu轉化為2-酮戊二酸鹽的效率降低時，P-II的一個Tyr殘基尿苷酸化，形成P-II-UMP。P-II-UMP引起Glu合成酶(GS)的脫腺苷化，因此使酶活化。相反，在氮源過剩的時候，P-II-UMP脫去尿苷酸，促進GS的腺苷酸化。P-II也能夠通過阻止NR-II(ntrB)轉化成為磷酸化NR-I(ntrC)，間接控制GS基因的轉錄(glnA)，NR-I是glnA的轉錄活化因子。一旦P-II發生尿苷酸化，整個反應過程就向著逆方向進行。

P-II蛋白約含有110個氨基酸殘基，序列非常保守。發生尿苷酸化的Tyr殘基位于蛋白的中間部位。在藍細菌中，P-II在Ser殘基上發生磷酸化，而不是尿苷酸化。

在甲烷原始細菌中，固氮酶鐵蛋白基因(nifH)有兩個開放閱讀框，與真細菌P-II蛋白高度相似(Sibold?L.，Henriquet?M.et?al.，1991)。這些蛋白可能涉及氮源固定的調節。

P-II蛋白最為保守的序列為包含了尿苷酸化的Tyr殘基的6個殘基：Y-[KR]-G-[AS]-[AE]-Y，第二個Y即為尿苷酸化殘基。另外的保守區域為：[ST]-x(3)-G-[DY]-G-[KR]-[IV]-[FW]-[LIYM]-x(2)-[LIVM]。

P-II通過ntr系統的介導，在轉錄的控制中也起著較為重要的作用(Bueno?etal.，1985)。當氮源受到限制時，活化器蛋白NtrC發生磷酸化，ntr調節的基因表現轉錄活性；相反，當氮源過量時，NtrC發生脫磷酸化，并且基因轉錄失活。

根據氨基酸同源比較的結果，本發明的多肽與上述的氮源調節蛋白P-II相似，并且包含了氮源調節蛋白P-II特征性的保守序列，因此認為此蛋白是一種新的氮源調節蛋白，具有與之相似的生物學功能，并命名為氮源調節蛋白P-II-8.8。

由于如上所述氮源調節蛋白P-II-8.8蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的氮源調節蛋白P-II-8.8蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新氮源調節蛋白P-II-8.8蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——氮源調節蛋白P-II-8.8以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼氮源調節蛋白P-II-8.8的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼氮源調節蛋白P-II-8.8的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產氮源調節蛋白P-II-8.8的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——氮源調節蛋白P-II-8.8的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——氮源調節蛋白P-II-8.8的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與氮源調節蛋白P-II-8.8異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中250-492位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1366位的序列。