[發(fā)明專利]一種新的多肽——含beta－內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00125227.5
• 申請日: 2000-09-19
• 公開（公告）號: CN1343784A
• 公開（公告）日: 2002-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/86;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/46
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

β-內(nèi)酰胺酶能催化抗菌素(青霉素/頭孢菌素家族的成員)的β-內(nèi)酰胺環(huán)的氨基水解。已知的β-內(nèi)酰胺酶有4類，A、B、C、D類，其中B類酶是含鋅蛋白質(zhì)，而其它三類A、C、D則為絲氨酸水解酶。A、C、D類的絲氨酸β-內(nèi)酰胺酶進化相關(guān)，且屬于同一超家族，該超家族也包括肽酶和各種青霉素結(jié)合蛋白。

4類β-內(nèi)酰胺酶都含有一個Ser-X-X-Lys功能域，其中Ser是活性位點殘基。雖然這3類絲氨酸β-內(nèi)酰胺酶同源，但它們的序列差異很大，除了活性Ser外，其余殘基保守性低。A、C、D類酶活性Ser附近的保守序列為：A類：[FY]-x-[LIVMFY]-x-S-[TV]-x-K-x(4)-[AGLM]-x(2)-[LC]，其中S是活性位點。C類：F-E-[LIVM]-G-S-[LIVMG]-[SA]-K，其中第一個S是活性位點。D類：[PA]-x-S-[ST]-F-K-[LIV]-[PAL]-x-[STA]-[LI]，其中S是活性位點。1990年N.Pastor等人發(fā)現(xiàn)A類蛋白具31個不變殘基，45，143，144，156號Gly和107，174，226，252號Pro保守。70，73，130，131，166，169，170，234，和236號殘基也保守，可能形成活性位點。66號Phe和45號Gly高度保守，它們可能與維持結(jié)構(gòu)有關(guān)。而81，199，207號Leu可能參與α螺旋2和9的相互作用。[MolecularMicrobiology，1990，4(11)：1957-1965]

本發(fā)明的蛋白質(zhì)含β-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域，具有上述相似的結(jié)構(gòu)，并且具有一致的保守序列，因而認為它是一種新的含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，與上述蛋白質(zhì)具類似的生物學(xué)功能。若表達異常，會影響一系列代謝過程的正常進行，導(dǎo)致各種免疫等方面的疾病。此外，其在相關(guān)疾病的診斷和治療中也有一定作用。

由于如上所述含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02蛋白在機體內(nèi)重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與含beta-內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)9.02異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中180-428位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1902位的序列。