[發(fā)明專利]一種新的多肽——人細(xì)胞色素組成蛋白45和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00119401.1
• 申請(qǐng)日: 2000-07-07
• 公開（公告）號(hào): CN1333280A
• 公開（公告）日: 2002-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人細(xì)胞色素組成蛋白45，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

細(xì)胞色素是一組具有色素的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞的電子轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中充當(dāng)電子載體。這些蛋白把來(lái)自糖類，脂肪以及其他食物代謝而來(lái)的高能電子轉(zhuǎn)變?yōu)锳TP，驅(qū)動(dòng)細(xì)胞多種需要能量反應(yīng)的能量主要來(lái)源。細(xì)胞色素因血紅素結(jié)合基團(tuán)而彼此相關(guān)，該基團(tuán)由包含緊密結(jié)合一個(gè)鐵原子的卟啉環(huán)構(gòu)成。鐵原子作為真正意義上的電子載體，在接受一個(gè)電子時(shí)由鐵變?yōu)閬嗚F。細(xì)胞色素從諸如NADH或是FADH2亞基的底物中接受電子，然后把它們傳給類似細(xì)胞色素或泛素等其他電子載體。細(xì)胞色素根據(jù)吸收光譜鑒別因其與血紅素基團(tuán)的作用不同被分為亞組a，b，c。細(xì)胞色素a，a3亞基，b562亞基，b566亞基，c以及c1亞基都是哺乳動(dòng)物中參與氧化磷酸化的線粒體膜呼吸鏈的成分。

細(xì)胞色素b5家族包括各種蛋白的血紅素結(jié)合域。一系列氧化還原酶的結(jié)構(gòu)由與b5的血紅素結(jié)合域同源的血紅素結(jié)合域及黃素脫氫酶或一個(gè)鉬蝶呤域并列構(gòu)成。在哺乳動(dòng)物中已被發(fā)現(xiàn)的成員有兩個(gè)：細(xì)胞色素b5及亞硫酸鹽氧化酶。細(xì)胞色素b5被發(fā)現(xiàn)在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中以膜結(jié)合形式存在，在紅細(xì)胞中以可溶形式存在。膜結(jié)合形式與脂類藥物代謝以及涉及NADPH的羥基化反應(yīng)有關(guān)，作為幾種膜結(jié)合加氧酶的電子載體起作用。不同哺乳動(dòng)物來(lái)源，包括來(lái)自人，馬，鼠，兔，豬的細(xì)胞色素b5由一條約含135個(gè)氨基酸的多肽單鏈構(gòu)成，該單鏈折疊成兩個(gè)結(jié)構(gòu)獨(dú)立的區(qū)域。N-端域約1-96個(gè)氨基酸殘基是一個(gè)極性催化域，血紅素基團(tuán)與之非共價(jià)結(jié)合，行使催化功能的主要是30-96位氨基酸。C-端疏水域，約自第96個(gè)殘基至末端，是膜結(jié)合域，它把多肽鏈固定于線粒體膜上。人細(xì)胞色素b5的可溶形式缺乏C-端膜結(jié)合域。在哺乳動(dòng)物中，血紅素結(jié)合域是高度保守的，約有84％的相似性，而哺乳動(dòng)物與鳥類在這一區(qū)域約有69％的相似性。b5有兩種同源形式，一種在微粒體中發(fā)現(xiàn)，一種在線粒體外膜中發(fā)現(xiàn)。其中有兩個(gè)絲氨酸殘基作為血紅素基的軸配體。

亞硫酸鹽氧化酶，由鉬蝶呤域及血紅素結(jié)合域構(gòu)成，位于線粒體膜間區(qū)，催化含硫氨基酸的氧化降解中的末端反應(yīng)，并把細(xì)胞色素c作為生理電子受體。該蛋白是一種分子量為115KD的二聚體，每個(gè)單體中含有一個(gè)作為輔基的鉬原子及一個(gè)[正鐵]血紅素。此外，細(xì)胞色素b5家族種的已知成員還包括酵母的乳酸脫氫酶，真菌，植物以及細(xì)菌的硝酸還原酶，果蠅肌蛋白TU-36B，裂殖酵母假擬蛋白SpAC1F12.10c，酵母假擬蛋白YMR073c，酵母假擬蛋白YMR272的血紅素結(jié)合域。我們用包括兩個(gè)組氨酸血紅素配體中第一個(gè)配體的一段片段作為細(xì)胞色素b5家族血紅素結(jié)合域的特征模板序列：[FY]-[LIVMK]-x(2)-H-P-[GA]-G[H是一個(gè)血紅素軸配體]。

含有上述特征序列模板的多肽或該多肽的拮抗劑，激動(dòng)劑及抑制劑可用于診斷預(yù)防及治療癌癥肌肉方面的疾病以及發(fā)育紊亂。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人細(xì)胞色素組成蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人細(xì)胞色素組成蛋白45。

由于如上所述人細(xì)胞色素組成蛋白45蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人細(xì)胞色素組成蛋白45蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人細(xì)胞色素組成蛋白45蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。?

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人細(xì)胞色素組成蛋白45以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人細(xì)胞色素組成蛋白45的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人細(xì)胞色素組成蛋白45的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人細(xì)胞色素組成蛋白45的方法。