[發明專利]正向和反向ABO血型的同步測定

有效

• 申請號: 00118488.1
• 申請日: 2000-06-08
• 公開（公告）號: CN1276527A
• 公開（公告）日: 2000-12-13
• 發明（設計）人: T·J·默科利諾;K·J·雷斯
• 申請（專利權）人: 奧索臨床診斷有限公司
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 張廣育,溫宏艷

本申請中參考了許多的專利和論文。將這些專利和論文的全部公開內容引進本申請中作為參考是為了更詳盡地描述在本文所描述和要求的發明以前本技術領域的技術人員已知的現有技術的狀況。

本發明涉及血型測定的領域，尤其涉及正向和反向血型測定的同步測定。

血型血清學要求在涉及病人輸血或器官移植之前，需要測定血液捐獻者和病人受體間的血細胞相容性。血細胞相容性是由病人血清中的抗體與捐獻者血細胞上的抗原不發生免疫反應來確定的。

許多不同的血型抗原被發現存在于每個個體的紅血細胞的表面上。這些抗原，遺傳基因的產物，以結合體存在，除了同一對雙胞胎外，所有個體間的這些結合體似乎是獨特的。血型檢測一般是通過檢測紅細胞來確定哪種抗原存在，哪種抗原不存在的過程，通常采用被檢測抗原的抗體進行檢測。另外，當一個人在他的或她的紅血細胞上沒有特定的紅細胞抗原時，他的或她的血清可能含有該抗原的抗體。抗體是否存在于血清中決定于人體的免疫系統以前是否被該特定抗原或與該抗原非常類似的物質激發并產生過應答反應。例如，紅血細胞是A型的人，即紅細胞上具有“A”抗原，他的或她的血清中有抗B抗體。因此，如果此人被輸入B型血液，就會發生免疫反應而引起嚴重的臨床后果。

作為另外一方面的考慮，應該注意到人體經常與花粉、食物、細菌和病毒中的抗原接觸。這些“天然”抗原中的一些抗原明顯地與于人的血型抗原相類似，以致于它們能刺激幾乎每一個接觸的人來產生抗體。因此，一定的抗體應該存在于紅細胞中缺少互補抗原的任何人的血清中。對于ABO系統，這確實如此，因此，經常對病人/捐獻者的血清進行第二種確定試驗。該檢測血清中ABO血型系統中的預期抗體試驗被稱作“反向”血型檢測。

ABO血型系統的抗體通常是免疫球蛋白M(IgM)。這些抗體的每個分子具有十個抗原結合位點。該IgM抗體足夠大以致跨越了紅血細胞之間的距離，因此當對其進行離心時，細胞將以“細胞-抗體-細胞-抗體”的網格形式結合在一起并將保持凝集狀態。例如，如果抗-A加到血型A或血型AB細胞中并離心混合物，當重新懸浮時，細胞將保持凝集的形式。用同樣的抗體，血型O和血型B細胞將以分離的細胞形式懸浮。由一種抗體，諸如IgM抗體引起的凝集，被稱作直接凝集。

輸血醫學中，由于上述原因，最常進行的試驗是測定ABO血型。現有技術是分別測定紅細胞上的抗原A、B，有時是A+B一起測定(正向型)；和確定(交叉檢測)檢測血清或血漿中的抗-A和抗-B抗體(反向型)。因此，最少采用4次試驗，但通常采用7次分試驗(樣品紅細胞上的抗原A、B、A+B；采用A₁、A₂、B、O試劑紅細胞，血清/血漿樣品中的抗-A和抗-B)。從這些測型操作的每一個試驗中得到(正向和反向類型)的結果是一致的。因此，僅在美國，血液中心每年大約要進行104000000次測定血型的試驗。

自20世紀初期以來，稱作“蘭斯泰訥”方法(Landsteiner，science?73：405(1931))的普通方法與Ashby(J.Exp.Med.29：267(1919))和Coombs(Brit.J.Exp.Pathol.26：255(1945))的方法的結合是將病人的紅血細胞加到含有血型抗體(如抗-A或抗-B)的標準實驗試管中，混合后使得發生抗體/抗原結合反應，然后離心。如果所測定的抗原存在，將發生抗體/抗原的結合并導致病人紅血細胞的凝集。用手搖動試管來移開“結塊”的細胞離心后在試管底部產生的塊結。然后進行主觀判斷，看移開的細胞是否是“結塊的”，并且看“結塊”的程度。

20世紀中葉，進行了許多努力來簡化所述技術以減小試驗的主觀性和降低錯誤率。人們認識到某種程度上，相容性試驗結果的持久性記錄可通過利用可濕性的，即非吸收性的或有些情況下可吸收性的、至少一部分表面積上載有必需的免疫學試劑的試驗載玻片或試驗板來獲得。在這方面，專利號為2770572、2850430、3074853、3272319、3424558、3502437和366642的美國專利以及歐洲專利申請#0104881-A₂描述了這種試驗板和相關儀器的選擇實例。在微板上進行血型鑒定的優點包括可簡單操作大量的樣品，通過儀器和計算機的內部處理進行結果的搜集和處理，來對凝集反應進行客觀的測定。一些帶有計算機控制的自動儀器和高通過量的分光光度計讀取器的昂貴的和專用的系統被引進到血庫的自動操作系統中(Chung，等.，Transfusion33：384(1992))。