[發(fā)明專利]一種新的多肽——人核苷酸還原酶59.62和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00117037.6
• 申請日: 2000-07-07
• 公開（公告）號(hào): CN1333352A
• 公開（公告）日: 2002-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/54
• 分類號(hào): C12N15/54;C12N9/02;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人核苷酸還原酶59.62，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

組織和微生物中，脫氧核苷酸都是由相應(yīng)的核苷酸通過以氫替代2’-OH基團(tuán)而形成的。催化這種核苷酸還原的有兩種類型的核糖核苷酸還原酶。在自然界廣泛分布并存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的一類酶含有非正鐵血紅素，其由一種以上的多肽鏈組成，對(duì)二磷酸(ADP、GDP、CDP及UDP)還原作用具有專一性。而第二種酶局限于某些微生物中，這類酶只含有一種多肽鏈，但在某些情況下形成寡聚物。核苷酸還原酶在生物體內(nèi)催化脫氧核糖核苷酸的還原合成，其提供了DNA合成所必需的前體。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，核苷酸還原酶是一種多聚酶，由一個(gè)大的亞單位(約由700-1000個(gè)氨基酸殘基組成)和一個(gè)小的亞單位(約由300-400個(gè)氨基酸殘基組成)所組成。

小的亞單位在生物體內(nèi)與兩個(gè)鐵離子結(jié)合(蛋白氨基酸序列中的谷氨酸、天冬酰胺及兩個(gè)組氨酸均參與金屬離子的結(jié)合)，且在該亞單位中還含有以活性酪氨酸位點(diǎn)。在原核生物、真核生物及病毒中均含有這種類型核苷酸還原酶，且它們的小亞單位均含有金屬離子結(jié)合殘基和活性酪氨酸位點(diǎn)[Peter?Reichard，1993，Science，260：1773-1776]。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人核苷酸還原酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人核苷酸還原酶59.62。

由于如上所述人核苷酸還原酶59.62蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人核苷酸還原酶59.62蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人核苷酸還原酶59.62蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人核苷酸還原酶59.62以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人核苷酸還原酶59.62的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人核苷酸還原酶59.62的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人核苷酸還原酶59.62的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——人核苷酸還原酶59.62的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——人核苷酸還原酶59.62的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人核苷酸還原酶59.62異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中28-1656位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1870位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。