[發明專利]一種新的多肽——人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00117032.5
• 申請日: 2000-07-07
• 公開（公告）號: CN1333249A
• 公開（公告）日: 2002-01-30
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅;吳海
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

神經絲氨酸蛋白酶抑制劑屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑家族，它是由中樞神經系統的軸突及外周神經系統神經元所分泌的分子量約為55Kda的糖蛋白，主要分布在神經系統中，在調節大腦發育及功能方面有重要功能。神經退化如阿爾茨海默氏病的發病機理與絲氨酸抑制劑及靶蛋白酶的失衡有關，α1-抗胰凝乳蛋白酶在老年斑中積累，其濃度在阿爾茨海默氏病患者的腦脊液中增加，與神經絲氨酸蛋白酶抑制劑在結構上有較大相似性的蛋白酶微管連接蛋白-1(PN-1)在阿爾茨海默氏病患者的腦脊液中含量下降，其它中樞神經系統的疾病與腦脊液的纖溶酶原催化抑制劑(PAI-1)的濃度有關。

1997年Schrimpf?SP等人克隆出的新的人類神經絲氨酸蛋白酶抑制劑基因(PI12)是絲氨酸蛋白酶抑制劑基因家族的新成員，它位于3號染色體長臂的26區域，該基因的mRNA主要分布在人類大腦RNA中，長約1.8kb，其表達產物由410個氨基酸組成，其68-85號氨基酸主要是帶負電的殘基。該基因的5′端的UTR包含81個核苷酸，3′端的UTR含有248個核苷酸，其1535-1540位是一多聚腺苷酸信號(AATAAA)。該蛋白與雞的絲氨酸蛋白酶抑制劑具有相似的開放閱讀框，核酸的相似性為78％，氨基酸組成有80％相同。該蛋白產物高度保守，其開放閱讀框(ORF)中僅一個氨基酸在人和雞中不同，該ORF的Ala16/Thr17和Ala19/Thr20是主要切割位點，前16個氨基酸構成的蛋白質組成信號肽(Osterwalder?et?al.，1996)，而ORF的Thr17是該蛋白的氨基端。其活性中心環(RCL)為Gly332-Tyr351，與靶絲氨酸蛋白酶的催化中心反應的易斷鍵為Arg-Met鍵。RCL的環區氨基酸與神經絲氨酸蛋白酶抑制劑的功能特異性有重要關聯。該蛋白可能起調節生長錐或突觸的蛋白水解酶的作用。[Genomics?1997?Feb15；40(1)：55-62]

神經絲氨酸蛋白酶抑制劑主要分布于生物體大腦，與大腦的功能及發育密切相關，該蛋白功能的受損會導致大腦功能發育的延遲或限制，從而引起進行性老年癡呆癥、智力發育遲緩等一系列大腦功能疾病。該蛋白與上述疾病的診斷及治療也有關。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌中，本發明的多肽的表達譜與人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27。

由于如上所述人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人神經絲氨酸蛋白酶抑制劑(PI12)83.27的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。