[發明專利]一種新的多肽——Ⅱ型膜蛋白12.65和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116937.8
• 申請日: 2000-06-30
• 公開（公告）號: CN1331113A
• 公開（公告）日: 2002-01-16
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——II型膜蛋白12.65，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

以不同方式與膜結合。大部分膜蛋白是以α-螺旋構象橫跨脂雙層，有些多肽鏈是單次跨膜蛋白，有些多次跨膜蛋白。跨膜蛋白的疏水區在脂雙層內與脂類分子疏水的尾部相互作用，親水的區域露在膜的兩側。有的跨膜蛋白在細胞質側的氨基酸殘基共價結合脂肪酸鏈插入胞質面的脂單層中，加強了膜蛋白與脂雙層疏水力的結合。跨膜蛋白在跨展脂雙層的節段大部分是非極性側鏈的氨基酸殘基所構成。

1999年Yokoyama-Kobayashi?M等人克隆出五個編碼II型膜蛋白的新的cDNA。這種膜蛋白的N端有18-30個疏水序列，即信號肽。信號肽有指導作用，指導分泌蛋白到內質網膜，且還作為一個開始-轉移信號，它在多肽鏈合成以前，被內質網膜上的信號肽酶切下來。信號肽有兩種成分：信號識別顆粒及其受體。在真核生物中，大多數分泌蛋白及膜蛋白需通過內質網膜和翻譯協同進行轉移。在轉移的第一步，新生肽的信號肽的疏水片段由一信號識別片段識別并導向內質網膜。然后，信號肽進入膜，而緊隨其后的新生鏈開始通過內質網膜上的轉移器。分泌蛋白或I型膜蛋白由信號肽酶在內質網膜的腔面切割，并由轉移鏈檢驗。分泌蛋白的剩余部分則釋放到內質網的腔內。I型膜蛋白被終止轉移序列的第二個疏水片段卯定在膜上，而II型膜蛋白有一個信號肽未被切割，作為跨膜部分存在于膜上，被稱為信號錨。該信號錨分為兩類：I型和II型，它們的N端分別定位在胞質溶膠和胞外。信號錨與信號肽有相同的切割特征，因而很難區分兩者。分泌蛋白或I型膜蛋白的cDNA的5＇端與一報告基因相融合。很多分泌蛋白或I型膜蛋白包括一個TGF-β超家族的新成員。一些融合基因的產物表達在細胞表面。融合的cDNA片段編碼一未切割的信號錨，若u-PA和一未切割的信號錨融合，則它仍留在膜中，而u-PA結構域在細胞表面表達。融合蛋白有兩條信號肽的下游序列：Ser-Gln-Ser及Ser-Leu-Cys，它們能被信號肽酶所識別。

[Yokoyama-Kobayashi?M，Gene，1999，7(10)：776-89]

II型膜蛋白對于膜結構的穩定性和功能及在細胞間的信號轉導方面有重要作用。在生物體內分布于細胞各種膜結構中，如內質網、高爾基體等結構。II型膜蛋白如：尿激酶型的血纖維蛋白溶解酶原存在于細胞表面，纖維蛋白凝固是通過血纖維蛋白溶酶原的活性而實現的。若它過度表達則會嚴重影響膜結構，引起細胞異常，從而導致各種疾病。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與II型膜蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為II型膜蛋白12.65。

由于如上所述II型膜蛋白12.65蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的II型膜蛋白12.65蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新II型膜蛋白12.65蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——II型膜蛋白12.65以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼II型膜蛋白12.65的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼II型膜蛋白12.65的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產II型膜蛋白12.65的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——II型膜蛋白12.65的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——II型膜蛋白12.65的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與II型膜蛋白12.65異常相關的疾病的方法。