[發明專利]乙肝病毒多態性檢測芯片的制作方法及其應用

有效

• 申請號: 00116875.4
• 申請日: 2000-06-30
• 公開（公告）號: CN1331346A
• 公開（公告）日: 2002-01-16
• 發明（設計）人: 趙建龍;袁正宏;朱濱;聞玉梅;孫悅;林旭;徐元森
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海冶金研究所;上海醫科大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海華東專利事務所
• 代理人: 費開逵

1、一種乙肝病毒基因多態性檢測芯片，其特征在于設計15-20聚探針，探針的Tm值(解鏈溫度)基本相同，突變位點盡可能位于序列中間。

針對前核心區設計的探針為：???????????????長度?????????????Tm

??TGGCTTTGGGGCAT????????????????????????14??????????????50

??TGGCTTTaGGGCATG???????????????????????15??????????????47.48

??TGGCTTTaGGaCATGGA?????????????????????17??????????????16

??GCTTTGGGaCATGGAC??????????????????????17??????????????49.45

針對基因型區設計的探針為：

??ACCATGCAAGACCTGC??????????????????????16??????????????48.77

??CATGCCGGACCTGC????????????????????????14??????????????50.47

??TTCGCAAAATTCCTATG?????????????????????17??????????????47.41

??TTTGGCAAGATTCCTATG????????????????????18??????????????49.54

通過點樣儀轉移到醛基修飾的玻片上，經SDS，硼氫化鈉溶液，純水處理制成。

2、一種乙肝病毒基因多態性檢測芯片制作方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)載玻片的修飾；

(2)探針設計及合成；

(3)探針的固定。

3、根據權利要求2所述的乙肝病毒基因多態性檢測芯片制作方法，其特征在于：載玻片用1-3mol/L?NaOH的50％-95％乙醇溶液中浸泡1-4小時85-150℃烘干，冷卻到室溫，置于0.2％-2％的3-氨丙基三甲氧基硅烷95％丙酮溶液中浸泡2-10分鐘，取出用丙酮冼，80-150℃烘0.5-1.5小時，冷到室溫，然后將玻片浸入0.1-0.2mol/L磷酸鉀溶液和5ml的25-40％戊二醛溶液的混合液中4小時，取出玻片，置75-85％相對濕度30℃10小時.然后用水沖洗室溫晾干。

4、根據權利要求2所述的乙肝病毒基因多態性檢測芯片制作方法，其特征在于寡核苷酸的5′端加上一段連接臂(polyT)，連接臂的長度為8-20聚時，5′端進行氨基修飾。

5、根據權利要求2所述的乙肝病毒基因多態性檢測芯片制作方法，其特征在于將探針稀釋30-40p?mol/μl通過點樣儀轉移到醛基修飾的玻片上，再經25℃，75％相對濕度的環境中放3天。室溫下將玻片浸于0.2％SDS振搖數分鐘，然后，玻片浸入純水中振搖數分鐘，室溫干燥數分鐘。再浸入硼氫化鈉溶液中振搖數分鐘，再浸于0.2％是SDS三次，每次1分鐘，玻片浸于純水中。

6、根據權利要求1所述的乙肝病毒基因多態性檢測芯片的應用，其特征在于根據乙肝病毒基因分型、突變及耐藥性信息設計探針，用熒光標記，全基因法擴增乙肝病毒DNA與芯片雜交從而得到乙肝病毒的相關性信息。

7、根據權利要求1所述的乙肝病毒基因多態性檢測芯片的應用，其特征在于根據丙肝病毒的分型信息，設計相應的探針作為陰性對照，應用于檢測丙肝病毒的基因分型。

8、根據權利要求6所述的乙肝病毒基因多態性檢測芯片的應用，其特征在于乙肝病毒DNA樣品處理方法為全基因擴增樣品并加上熒光標記，然后用核酸酶切斷成適當長度；或者全基因擴增樣品，然后用核酸酶切斷成合適長度后，再用末端標記法加上熒光標記。