[發(fā)明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白10.45和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116845.2
• 申請日: 2000-06-28
• 公開（公告）號: CN1331174A
• 公開（公告）日: 2002-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白10.45，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

的轉(zhuǎn)錄調(diào)控對于基因的正常表達及發(fā)揮生物學(xué)功能是十分重要的，通常由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子來完成這一過程。轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子在生物體內(nèi)參與決定基因在何種組織及何種發(fā)育階段開始轉(zhuǎn)錄，編碼這類蛋白的基因如發(fā)生突變，不但該基因自身不能正常表達，而且受其調(diào)節(jié)的許多基因也不能正常的進行轉(zhuǎn)錄與表達。轉(zhuǎn)錄因子對基因表達的調(diào)控主要通過轉(zhuǎn)錄因子與特定的DNA序列結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用及轉(zhuǎn)錄因子與常規(guī)轉(zhuǎn)錄機構(gòu)的相互作用在完成。根據(jù)結(jié)構(gòu)基序的不同，已知的DNA結(jié)合蛋白可主要分為兩類：含有螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序的蛋白及鋅指蛋白[Kamal?Chowdhury，Heidi?Rohdewohld?et?al.，Nucleic?AcidsResearch，1988，16：9995-10011]。

研究發(fā)現(xiàn)，鋅指蛋白在不同生物的各種組織中均有表達，這些組織包括造血細胞、腦、神經(jīng)系統(tǒng)、各種與腫瘤相關(guān)的組織和無限增殖細胞系組織等。其在這些組織的基因表達過程中均起著極為重要的作用。

鋅指蛋白及其結(jié)構(gòu)域根據(jù)其鋅原子結(jié)合的數(shù)目及位置的不同可分為不同的類別。C2H2型鋅原子結(jié)合結(jié)構(gòu)域最早在蛋白轉(zhuǎn)錄因子IIIA中被得到，是真核生物轉(zhuǎn)錄因子中分布最廣的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。C2H2型鋅指蛋白的蛋白序列中均含有下列保守的序列特征：(Tyr，Phe)-X-Cys-X(2，4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3，5)-His(其中X表示任意氨基酸殘基；半胱氨酸與組氨酸與鋅原子形成配位鍵，結(jié)合鋅原子；其它三個保守的氨基酸殘基形成疏水性中心區(qū)域；其它變化的氨基酸殘基負責(zé)介導(dǎo)蛋白與其它分子的相互作用)。一個鋅指蛋白可能含有一個或多個鋅指結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域在生物體內(nèi)獨立完成自己的生理學(xué)功能。在很多情況下，含有鋅指結(jié)構(gòu)域的蛋白與特殊的雙鏈及單鏈DNA序列相互作用，起著轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的作用。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，C2H2類型的鋅指結(jié)構(gòu)域不僅在一些組織的基因表達過程中起重要的調(diào)節(jié)作用，其在發(fā)育調(diào)節(jié)過程亦起著非常關(guān)鍵的作用。其表達異常將直接導(dǎo)致生物體內(nèi)一些相關(guān)基因的表達異常，從而引發(fā)各種相關(guān)的疾病。

1997年，Gitschier等人又從人中克隆得到了一新的人鋅指蛋白4，并對該蛋白的結(jié)構(gòu)及功能進行了研究。該蛋白的氨基酸序列中亦含有如上所述的C2H2型鋅指蛋白保守的序列片段。該蛋白在生物體的多種組織均有表達，該蛋白的突變或表達異常將導(dǎo)致體內(nèi)相關(guān)組織及器官的發(fā)育異常，進而引發(fā)各種疾病。其在生物體內(nèi)參與調(diào)控多種基因的轉(zhuǎn)錄與表達，該蛋白的突變或表達異常將直接影響相關(guān)基因在體內(nèi)的表達，其在生物體內(nèi)通常與一些胚胎發(fā)育紊亂性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病及相關(guān)組織的惡性紊亂性疾病，如腫瘤及癌癥等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。該蛋白還可用于診斷及治療上述各種相關(guān)的疾病。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人鋅指蛋白4的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人鋅指蛋白10.45。

由于如上所述人鋅指蛋白10.45蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白10.45蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白10.45蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人鋅指蛋白10.45以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白10.45的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白10.45的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人鋅指蛋白10.45的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人鋅指蛋白10.45的抗體。