[發(fā)明專利]一種新的多肽——人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116830.4
• 申請日: 2000-06-28
• 公開（公告）號: CN1331165A
• 公開（公告）日: 2002-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

真核生物中mRNA的轉(zhuǎn)錄與加工過程較為復(fù)雜，真核生物中大多數(shù)編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因是不連續(xù)的基因，存在內(nèi)含子，在RNA聚合酶II的作用下，這些內(nèi)含子與外顯子一起被轉(zhuǎn)錄，因此mRNA的原初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是分子量較大的前體——異質(zhì)性RNA(hnRNA)。異質(zhì)性hnRNA經(jīng)過加工，即5’加帽，3’加多聚A及內(nèi)含子的剪切和外顯子的拼接等過程，產(chǎn)生有功能的成熟的mRNA，釋放至細(xì)胞質(zhì)中。

內(nèi)含子的剪切與外顯子的連接過程是多步驟的，而且需要多種因子參與。實(shí)驗(yàn)表明實(shí)在一個大小約為60S，由多種小分子細(xì)胞核核蛋白顆粒(U1ˉU6?snRNP，small?nuclear?ribonucleoprotein?particles)和多種蛋白質(zhì)的復(fù)合物被稱為剪切體的作用下完成的。SnRNA是細(xì)胞核中存在的另一類小分子RNA，在代謝上非常穩(wěn)定，一般常見的snRNA以U1ˉU6表示，除U6?snRNA被RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄外，其他U1～U5?snRNA均在RNA聚合酶II催化下形成。存在有轉(zhuǎn)錄后成熟的過程。SnRNA不游離存在，它們同特有的蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合物，即小分子核糖核蛋白顆粒(snRNP)。

試驗(yàn)表明，小分子核糖核蛋白在RNA前體的剪切過程中有重要作用。如在mRNA前體剪切作用中，U1snRNA5’端和mRNA前體內(nèi)含子5’端保守序列互補(bǔ)，U1?snRNA和U2?snRNA分別于mRNA前體內(nèi)含子5’剪切位點(diǎn)和內(nèi)含子分子位點(diǎn)堿基配對形成了復(fù)合物，同時，U4、U6?snRNA彼此間堿基配對，含有與U5?snRNP結(jié)合成復(fù)合物，并與上述mRNA前體和U1、U2?snRNP的復(fù)合物結(jié)合，形成一個高分子量的60S的剪切體。剪切體完成mRNA前體的剪切過程。

試驗(yàn)表明，準(zhǔn)確的進(jìn)行mRNA前體剪切過程在維持正常審理功能中發(fā)揮了重要的作用，在一切遺傳疾病如在β-地中海貧血病中發(fā)現(xiàn)，β-珠蛋白mRNA前體存在不正常的剪切與加工。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人小分子細(xì)胞核核蛋白U5的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54。

由于如上所述人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人小分子細(xì)胞核核蛋白12.54異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；