[發明專利]一種新的多肽——線粒體肌氨酸激酶亞基22.11和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116817.7
• 申請日: 2000-06-28
• 公開（公告）號: CN1331091A
• 公開（公告）日: 2002-01-16
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——線粒體肌氨酸激酶亞基22.11，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

及其異構酶在能量代謝過程中起著重要的作用，催化高能量狀態的磷酸從ATP向肌氨酸的可逆性轉移，轉化為ADP和磷酸肌氨酸(Bessman，S.P.，andCarpenter，C.L.，1985)。當在心臟、骨骼肌、平滑肌和腦中達到一定的濃度時，CK酶被激活，從而促進這些組織中的能量代謝反應。細胞核基因能夠編碼三種類型的CK蛋白亞基，它們分別是MCK(muscl)、BCK(brain)、MtCK(mitochondrial)。在成人的肌肉、心臟和腦中，線粒體肌氨酸激酶(MtCK)約占據了整個細胞內CK酶活性的7—48％(Jacobs，H.，Heldt，H.W.，andKlingenberg，M.，1964；Norwood，W.I.，Ingwall，J.S.et?al.，1983)。MtCK能夠通過轉變由于氧化狀態的磷酸轉化為磷酸肌氨酸產生的ATP而與呼吸鏈進行耦聯。

MtCK亞基的一些區域的序列是高度保守的，比如由外顯子5編碼的第190—218位殘基，與所有已知的CK序列有83％的相似性，在第278位的Cys殘基周圍的區域，即活性位點(Mahowald，T.A.，Noltmann，E.A.，and?Kuby，S.A.，1962；Smith，D.J.，and?Kenyon，G.L.，1974)，發現30個殘基中就有23個與CK序列相似。但是，56個氨基末端的MtCK殘基與細胞質CK相似性卻很低(26％)。由此可見，MtCK雖然屬于CK基因家族，與細胞質中的MCK和BCK異構酶還是有較為明顯的分歧。

在染色體上，MtCK基因總共占據了5.5Kb，包含了9個外顯子，編碼一段416氨基酸數的前體MtCK(包括一段運輸肽在內)。外顯子序列的長度從86—310Bp不等，聚集成兩組(外顯子1—6和7—9)，之間被一段巨大的(1.7Kb)內含子隔開，其它的7個內含子都短于600Bp。內含子和外顯子相連接處周圍的核苷序列與那些AG-GT切割接合區域的連接規則相同(Breathnach，R.，and?Chambon，P.，1981)。在MtCK前體中含有一段核苷序列編碼38個氨基酸殘基的運輸蛋白，對于線粒體的定位和輸送非常重要。

MtCK的mRNA在體內是組織特異性表達的，在成人的骨骼肌、腦室、心室表達水平較高，而在小腸和胎盤中較低，在肝臟中沒有表達。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與線粒體肌氨酸激酶亞基的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為線粒體肌氨酸激酶亞基22.11。

由于如上所述線粒體肌氨酸激酶亞基22.11蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的線粒體肌氨酸激酶亞基22.11蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新線粒體肌氨酸激酶亞基22.11蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——線粒體肌氨酸激酶亞基22.11以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼線粒體肌氨酸激酶亞基22.11的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼線粒體肌氨酸激酶亞基22.11的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產線粒體肌氨酸激酶亞基22.11的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——線粒體肌氨酸激酶亞基22.11的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——線粒體肌氨酸激酶亞基22.11的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與線粒體肌氨酸激酶亞基22.11異常相關的疾病的方法。