[發(fā)明專利]一種人線粒體溶質(zhì)載體蛋白異構(gòu)體及其編碼序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116795.2
• 申請日: 2000-06-27
• 公開（公告）號: CN1281895A
• 公開（公告）日: 2001-01-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李能干;許相儒;肖華勝;楊義生;陳竺;韓澤廣
• 申請（專利權(quán)）人: 國家人類基因組南方研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;C07K16/18;C07H21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 復(fù)旦大學(xué)專利事務(wù)所
• 代理人: 陸飛

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、酶學(xué)、生理學(xué)以及基因工程等領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種在人類垂體中表達的hMSC-homolog蛋白及其核酸序列。本發(fā)明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

線粒體是真核生物體內(nèi)提供能量的場所。通過復(fù)雜的生物化學(xué)作用，能量主要以ADP／ATP的形式臨時儲存下來，再通過一些載體將ADP／ATP轉(zhuǎn)運到需要能量的地方去。這些載體被稱做腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)移酶(adenine?nucleotide?translocase)或者ADP／ATP轉(zhuǎn)運子(ADP／ATP?translocator)或者線粒體溶質(zhì)載體(mitochondrialsolute?carriers，MSC)。(Mol?Endocrinol?1989?Sep；3(9)：1498-505)。這樣的背景下，這些載體蛋白的重要性不言而喻。

本發(fā)明中，我們在人類垂體中克隆到人hMSC基因(Genbank?AccessionNo．AF155660)的同源基因hMSC-homolog。

在本發(fā)明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的人類hMSC-homolog蛋白序列及其核酸序列。

本發(fā)明的第一目的就是提供一種新的人基因hMSC-homolog(Genbank?AccessionNo．AF267854)，該基因是一個人hMSC-homolog蛋白基因。

本發(fā)明的第二目的是提供一種新的人蛋白hMSC-homolog。

本發(fā)明的第三目的是提供一種利用重組技術(shù)生產(chǎn)上述的新的人hMSC-homolog蛋白和核酸序列的方法。

本發(fā)明還提供了這種人hMSC-homolog蛋白多肽和編碼序列的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有人hMSC-homolog蛋白質(zhì)活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO．6中從核苷酸第379-909位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO．6中從核苷酸第379-909位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO．7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO．6中從核苷酸第379-909位的核苷酸序列。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離出的人hMSC-homolog蛋白質(zhì)多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO．7氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO．7序列的多肽。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞。在一個實例中該宿主細胞是大腸桿菌；在另一實例中，該宿主細胞是真核細胞。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種產(chǎn)生具有人hMSC-homolog蛋白質(zhì)活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有人hMSC-homolog蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調(diào)控序列，形成人hMSC-homolog蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO．6中從核苷酸第379-909位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉(zhuǎn)入宿主細胞，形成人hMSC-homolog蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達人hMSC-homolog蛋白多肽的條件下，培養(yǎng)步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有人hMSC-homolog蛋白活性的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO．6中第379-909位的序列。

本發(fā)明還提供了與hMSC-homolog蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。

在本發(fā)明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態(tài)下位于其兩側(cè)的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經(jīng)與天然狀態(tài)下伴隨核酸的組份分開，而且已經(jīng)與在細胞中伴隨其的蛋白質(zhì)分開。