[發(fā)明專利]一種新的多肽——人蛋白磷酸酶12.43和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00116764.2
• 申請(qǐng)日: 2000-06-26
• 公開（公告）號(hào): CN1331330A
• 公開（公告）日: 2002-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N9/18;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/42;C12Q1/68;A61K38/46
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人蛋白磷酸酶12.43，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

號(hào)傳導(dǎo)中，最重要的調(diào)控機(jī)制是蛋白的磷酸化與去磷酸化。蛋白的磷酸化與去磷酸化分別由蛋白激酶和蛋白磷酸酶所催化。蛋白磷酸酶被認(rèn)為是頭等重要的，因?yàn)榇嗣笇⒓っ杆せ畹男盘?hào)通路關(guān)閉，阻止了信號(hào)的無限制的傳遞。蛋白磷酸酶在調(diào)節(jié)酶活性，大分子蛋白的組裝，細(xì)胞內(nèi)蛋白的分配，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)水解，信號(hào)通路，細(xì)胞周期循環(huán)，T細(xì)胞激活和神經(jīng)遞質(zhì)受體激活等一系列重要的生理活動(dòng)中都起著重要的作用。

蛋白磷酸酶2調(diào)控亞基A全酶(protein?phosphatase2，PP2A)在各種細(xì)胞中都有發(fā)現(xiàn)，并且占細(xì)胞蛋白總量的0.3-1％，是細(xì)胞內(nèi)主要的絲氨酸/酪氨酸蛋白磷酸酶之一，調(diào)控有絲分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated?proteinkinase，MAPK)，在細(xì)胞周期調(diào)控，生長因子信號(hào)傳遞和腫瘤發(fā)生等生理活動(dòng)中起重要作用。【Current?Opinion?in?Cell?Biology2000，12：180-185】

PPP2R1B基因編碼PP2A的β同工酶。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，PPP2R1B的突變會(huì)導(dǎo)致肺癌，直腸癌，乳腺癌，子宮癌等等癌癥，因此被認(rèn)為是一種抑癌基因。【Biochim.Biophys.Acta1155：207-226，1993.】

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人蛋白磷酸酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人蛋白磷酸酶12.43。

由于如上所述人蛋白磷酸酶12.43蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人蛋白磷酸酶12.43蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人蛋白磷酸酶12.43蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人蛋白磷酸酶12.43以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人蛋白磷酸酶12.43的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人蛋白磷酸酶12.43的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人蛋白磷酸酶12.43的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——人蛋白磷酸酶12.43的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——人蛋白磷酸酶12.43的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人蛋白磷酸酶12.43異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中1621-1962位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2604位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人蛋白磷酸酶12.43蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。