[發(fā)明專利]一種新的多肽——醛/酮還原酶15和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00116653.0
• 申請(qǐng)日: 2000-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN1329149A
• 公開（公告）日: 2002-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/53
• 分類號(hào): C12N15/53;C12N9/02;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——醛/酮還原酶15，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

醛/酮還原酶家族包括許多結(jié)構(gòu)、功能依賴于NADPH的氧化還原酶和其他一些蛋白。這些酶可以參與催化還原范圍廣泛的羧基化合物，如糖、葡萄醛酸、醇激素以及醛、酮的一些異源物質(zhì)。

醛/酮還原酶家族的成員通常由約300個(gè)氨基酸殘基組成。其保守序列有3個(gè)，第一個(gè)位于N端，序列為G-(FY)-R-(HSAL)-(LIVMF)-D-(STAGC)-(AS)-X(5)-E-X-G；第二個(gè)位于中部，序列為(LIVFMY)-X(9)-(KREQ)-X-(LIVM)-G-(LIVM)-(SC)-N-(FY)(嗎啡-6-脫氫酶無此結(jié)構(gòu))；第三個(gè)位于C端，序列為(LIVM)-(PAIV)-(KR)-(ST)-X(4)-R-X(2)-(GSTAEQK)-(NSL)-X(2)-(LIVMFA)(大腸桿菌假設(shè)蛋白yafB無此結(jié)構(gòu))；K是一個(gè)活性位點(diǎn)殘基，5-磷酸-砒哆醛通過對(duì)Lys的化學(xué)修飾，進(jìn)而影響酶的催化效率。

二級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示，這些蛋白質(zhì)都有β8/α8桶狀結(jié)構(gòu)。由于一些隨意選擇的介入，這個(gè)桶狀結(jié)構(gòu)并非完全對(duì)稱。

醛/酮還原酶家族由一些酶功能和結(jié)構(gòu)相似的蛋白組成，這些蛋白的保守序列顯示了它們?cè)谘莼^程中的相關(guān)性。這些相似性可以用來解釋酶底物的非專一性與不可預(yù)測(cè)性，還可以證明為什么醛糖還原酶抑制劑在治療糖尿病并發(fā)癥方面的低效及副作用。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與醛/酮還原酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為醛/酮還原酶15。

由于如上所述醛/酮還原酶15蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的醛/酮還原酶15蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新醛/酮還原酶15蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——醛/酮還原酶15以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼醛/酮還原酶15的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼醛/酮還原酶15的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)醛/酮還原酶15的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——醛/酮還原酶15的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——醛/酮還原酶15的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與醛/酮還原酶15異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中345-755位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1576位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。