[發明專利]一種新的多肽——活化GTP酶的蛋白負調控子9.02和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116629.8
• 申請日: 2000-06-21
• 公開（公告）號: CN1330078A
• 公開（公告）日: 2002-01-09
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——活化GTP酶的蛋白負調控子9.02，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

體結合后，活化受體本身的酪氨酸蛋白激酶，激酶再磷酸化靶蛋白的酪氨酸殘基，再通過一系列磷酸化的級聯反應，影響基因的表達。這條通路的特點是不需通過G蛋白，而是通過受體自身的酪氨酸蛋白激酶的激活來完成信號跨膜轉導的。(北京師范大學·《細胞生物學》1998，第426頁)

IRAl基因是酵母具有酪氨酸蛋白激酶活性的循環AMP通路的負調控子，IRA2解碼的蛋白有3079個氨基酸，它有45％相似于IRA1蛋白。IRA1蛋白與具有酪氨酸蛋白激酶活性的GTP酶活化蛋白同源的區域在IRA2蛋白中亦存在。IRA2基因的等位基因是glc4。IRA2基因斷裂會導致熱休克的敏感性與氮饑餓的增高，子代缺陷，抑制cdc25突變的致命性。IRA1和IRA2斷裂突變顯示IRA1和IRA2負調控具有酪氨酸蛋白激酶活性的循環AMP通路。IRA2序列的表達在熱休克的敏感性的互補作用上與活化GTP酶的蛋白極為相似。IRA蛋白能夠負調控具有酪氨酸蛋白激酶活性的活化GTP酶的蛋白的活性。(Mol?Cell?Biol?1990Aug；10(8)：4303-13)

IRA2基因的斷裂或缺失會導致其表達異常，導致熱休克的敏感性與氮饑餓的增高或產生子代缺陷。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv?304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與活化GTP酶的蛋白負調控子的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為活化GTP酶的蛋白負調控子9.02。

由于如上所述活化GTP酶的蛋白負調控子9.02蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的活化GTP酶的蛋白負調控子9.02蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新活化GTP酶的蛋白負調控子9.02蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——活化GTP酶的蛋白負調控子9.02以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼活化GTP酶的蛋白負調控子9.02的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼活化GTP酶的蛋白負調控子9.02的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產活化GTP酶的蛋白負調控子9.02的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——活化GTP酶的蛋白負調控子9.02的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——活化GTP酶的蛋白負調控子9.02的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與活化GTP酶的蛋白負調控子9.02異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中1177-1425位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2391位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。