[發(fā)明專利]一種新的多肽——人I類氨酰基－tRNA合成酶10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116594.1
• 申請日: 2000-06-19
• 公開（公告）號: CN1330144A
• 公開（公告）日: 2002-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N9/00;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人I類氨酰基-tRNA合成酶10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在mRNA的翻譯過程中，tRNA起著將mRNA的密碼子與相應(yīng)的氨基酸對應(yīng)起來的功能。tRNA分子上的反密碼子與其對應(yīng)的氨基酸之間并無結(jié)構(gòu)上的相關(guān)性，而且tRNA本身并不能催化相應(yīng)氨基酸的荷載，將tRNA與相應(yīng)的氨基酸結(jié)合起來的反應(yīng)是由氨酰基-tRNA合成酶催化的。

氨酰基tRNA合成酶合成氨酰基-tRNA的反應(yīng)分為兩步：氨基酸首先活化成氨酰基腺苷酸，之后，氨酰基腺苷酸再與tRNA生成氨酰基-tRNA。氨酰基-tRNA合成酶通過tRNA分子上的“副密碼子”來識別不同的tRNA，以便把正確的氨基酸與tRNA結(jié)合起來。

每一種氨基酸都對應(yīng)著一種氨酰基-tRNA合成酶，因此，20種氨基酸就有20種不同的氨酰基-tRNA合成酶。但這20種氨酰基-tRNA合成酶彼此是有關(guān)系的。根據(jù)結(jié)構(gòu)和序列的不同，20種氨酰基-tRNA合成酶可以分成兩類，I類和II類。I類酶的催化部分含有Rossmann折疊構(gòu)成的骨架，這是一種核酸結(jié)合區(qū)域；II類酶的骨架則由一種新的反向平行折疊構(gòu)成。

有些氨酰基-tRNA合成酶的N端序列相當(dāng)保守，特別是四肽序列His-Ile-Gly-His(′HIGH′)。此序列在精氨酸，色氨酸，谷氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，酪氨酸等的相應(yīng)的氨酰基-tRNA合成酶中都有發(fā)現(xiàn)。它們都屬于I類合成酶。其保守區(qū)域是：P-x(0，2)-[GSTAN]-[DENQGAPK]-x-[LIVMFP]-[HT]-[LIVMYAC]-G-[HNTG]-[LIVMFYSTAGPC]

氨酰基-tRNA合成酶提供合成蛋白質(zhì)的可用的氨酰基-tRNA。如果某種氨酰基-tRNA合成酶缺失，會造成對應(yīng)的氨酰基-tRNA不能正確形成，導(dǎo)致合成蛋白質(zhì)過程的過早終止，形成沒有功能的蛋白。如果某種氨酰基-tRNA合成酶發(fā)生突變，識別另一種氨基酸，則形成的蛋白質(zhì)包含不正確的氨基酸序列，如果這種變異發(fā)生在對該蛋白質(zhì)的功能來說關(guān)鍵的氨基酸位點上，那么形成的蛋白質(zhì)將不能正確折疊而沒有功能，或者功能減弱或增強(qiáng)，或者改變了作用的底物而使其功能發(fā)生變化。這種功能上的變化常常導(dǎo)致疾病。

例如，在25％—30％的人腫瘤中，發(fā)現(xiàn)異常的Ras蛋白，在Ras的12位獲61位殘基的點突變，又甘氨酸代替了纈氨酸，抑制Ras本身以及GAP刺激的GTP酶的活性，因此不能是Ras-GTP轉(zhuǎn)變成Ras-GDP，導(dǎo)致Ras長期處于活性狀態(tài)，不停頓的向下游發(fā)放信號，引起細(xì)胞的異常增殖，從而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。

氨酰基-tRNA合成酶的突變還可能蛋白質(zhì)的分揀和分泌紊亂以及膜受體的功能失常等，引起各種內(nèi)分泌疾病，免疫系統(tǒng)疾病，神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病等。

本發(fā)明的蛋白質(zhì)含有I類氨酰基-tRNA合成酶的特征性保守區(qū)域，并且，通過對表達(dá)譜的分析發(fā)現(xiàn)，正常肝組織中的II類氨酰基-tRNA合成酶表達(dá)量比肝癌組織中的表達(dá)量高，在正常喉組織和喉癌組織中也有相同的發(fā)現(xiàn)。綜上所述，認(rèn)為本發(fā)明的多肽是一種新的I類氨酰基-tRNA合成酶，具有相似的生物學(xué)功能，并命名為人I類氨酰基-tRNA合成酶10。

由于如上所述人I類氨酰基-tRNA合成酶10蛋白在機(jī)體內(nèi)重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人I類氨酰基-tRNA合成酶10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人I類氨酰基-tRNA合成酶10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人I類氨酰基-tRNA合成酶10以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人I類氨酰基-tRNA合成酶10的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人I類氨酰基-tRNA合成酶10的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人I類氨酰基-tRNA合成酶10的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——人I類氨酰基-tRNA合成酶10的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——人I類氨酰基-tRNA合成酶10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。