[發明專利]一種新的多肽——組氨酰－tRNA合成酶類似蛋白10.45和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116580.1
• 申請日: 2000-06-19
• 公開（公告）號: CN1329010A
• 公開（公告）日: 2002-01-02
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

tRNA起著將mRNA的密碼子與相應的氨基酸對應起來的功能。tRNA分子上的反密碼子與其對應的氨基酸之間并無結構上的相關性，而且tRNA本身并不能催化相應氨基酸的荷載，將tRNA與相應的氨基酸結合起來的反應是由氨酰基-tRNA合成酶催化的。

氨酰基tRNA合成酶合成氨酰基-tRNA的反應分為兩步：氨基酸首先活化成氨酰基腺苷酸，之后，氨酰基腺苷酸再與tRNA生成氨酰基-tRNA。氨酰基-tRNA合成酶通過tRNA分子上的“副密碼子”來識別不同的tRNA，以便把正確的氨基酸與tRNA結合起來。

每一種氨基酸都對應著一種氨酰基-tRNA合成酶，因此，20種氨基酸就有20種不同的氨酰基-tRNA合成酶。但這20種氨酰基-tRNA合成酶彼此是有關系的。根據結構和序列的不同，20種氨酰基-tRNA合成酶可以分成兩類，I類和II類。I類酶的催化部分含有Rossmann折疊構成的骨架，這是一種核酸結合區域；II類酶的骨架則由一種新的反向平行折疊構成。

有些氨酰基-tRNA合成酶的N端序列相當保守，特別是四肽序列His-Ile-Gly-His(′HIGH′)。此序列在精氨酸，色氨酸，谷氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，酪氨酸等的相應的氨酰基-tRNA合成酶中都有發現。它們都屬于I類合成酶。

氨酰基-tRNA合成酶提供合成蛋白質的可用的氨酰基-tRNA。如果某種氨酰基-tRNA合成酶缺失，會造成對應的氨酰基-tRNA不能正確形成，導致合成蛋白質過程的過早終止，形成沒有功能的蛋白。如果某種氨酰基-tRNA合成酶發生突變，識別另一種氨基酸，則形成的蛋白質包含不正確的氨基酸序列，如果這種變異發生在對該蛋白質的功能來說關鍵的氨基酸位點上，那么形成的蛋白質將不能正確折疊而沒有功能，或者功能減弱或增強，或者改變了作用的底物而使其功能發生變化。這種功能上的變化常常導致疾病。

例如，在25％—30％的人腫瘤中，發現異常的Ras蛋白，在Ras的12位獲61位殘基的點突變，又甘氨酸代替了纈氨酸，抑制Ras本身以及GAP刺激的GTP酶的活性，因此不能是Ras-GTP轉變成Ras-GDP，導致Ras長期處于活性狀態，不停頓的向下游發放信號，引起細胞的異常增殖，從而導致癌癥的發生。

氨酰基-tRNA合成酶的突變還可能蛋白質的分揀和分泌紊亂以及膜受體的功能失常等，引起各種內分泌疾病，免疫系統疾病，神經肌肉系統疾病等。通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與組氨酰-tRNA合成酶同源蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45。

由于如上所述組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——組氨酰-tRNA合成酶類似蛋白10.45的抗體。