[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白10.56和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116510.0
• 申請日: 2000-06-14
• 公開（公告）號: CN1328056A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白10.56，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

內存在著很大一類蛋白，它們的蛋白序列中均含有一個至多個鋅原子結合結構域，這類蛋白在生物體內參與各種蛋白與核酸、蛋白與蛋白間的相互作用，它們通常作為轉錄因子及信號傳導分子參與相關組織基因的表達與調控，這類蛋白構成了一個很大的蛋白家族，被稱為鋅指蛋白。在人的基因組中約含有300到700個鋅指蛋白，這些鋅指蛋白在生物體內與核苷酸結合，發揮著許多重要的生物學功能，最重要的作用就是調節基因的轉錄與表達。研究發現，鋅指蛋白在不同生物的各種組織中均有表達，這些組織包括造血細胞、腦、神經系統、各種與腫瘤相關的組織和無限增殖細胞系組織等。其在這些組織的基因轉錄與表達過程中起極為重要的調控作用。

鋅指蛋白的鋅指結構主要有以下幾種：C2H2構型、C2C2構型、C2HC構型、C2HC4C構型、C3H構型、C3HC4構型。其中含C2H2構型的鋅指蛋白基因構成人類基因組最大的一族基因。近些年，人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種構型的鋅指蛋白，并對這些鋅指蛋白的生物學功能及其染色體定位等進行了深入地研究。C2H2型鋅指蛋白與基因的轉錄活化及抑制有關，這些蛋白的表達異常將引發各種發育紊亂性疾病、各種腫瘤的發生、各種遺傳性疾病及免疫系統疾病[Kamal?Chowdhury，Heidi?Rohdewohld?et?al.，NucleicAcids?Research，1988，16：9995-10011]。

C2H2型鋅原子結合結構域最早在蛋白轉錄因子IIIA中被得到，是真核生物轉錄因子中分布最廣的DNA結合結構域。C2H2型鋅指蛋白的蛋白序列中均含有下列保守的序列特征：(Tyr，Phe)-X-Cys-X(2，4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3，5)-His(其中X表示任意氨基酸殘基；半胱氨酸與組氨酸與鋅原子形成配位鍵，結合鋅原子；其它三個保守的氨基酸殘基形成疏水性中心區域；其它變化的氨基酸殘基負責介導蛋白與其它分子的相互作用)。一個C2H2型鋅指蛋白可能含有一個或多個如上所述的鋅指結構域，這些結構域在生物體內獨立完成自己的生理學功能。在很多情況下，含有鋅指結構域的蛋白與特殊的雙鏈及單鏈DNA序列相互作用，起著轉錄調節因子的作用。現有研究發現，C2H2類型的鋅指結構域不僅在一些組織的基因表達過程中起重要的調節作用，其在生物體的發育調節過程亦起著非常關鍵的作用。

在所有的C2H2型鋅指蛋白中又有一部分蛋白，其蛋白序列中含有一果蠅分節基因相關的序列片段，這些蛋白構成了C2H2型鋅指蛋白的Kruppel亞家族。所有的C2H2型鋅指蛋白Kruppel亞家族的成員均含有如上所述的C2H2型鋅指蛋白家族的保守的序列片段。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個拷貝，其拷貝數不同(鋅指個數不同)則功能也不同。鋅指蛋白與不同長度的DNA的結合依賴于指結構的數量，多指結構可能與復合物的結合穩定性有關，而復合物是RNA聚合酶轉錄的作用位點。研究發現，許多鋅指蛋白Kruppel亞家族的鋅指結構域相互連接區域也是高度保守的，這一區域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中組氨酸與半胱氨酸為金屬離子的結合位點，而X為可變氨基酸殘基。這一區域對于鋅指結構的形成是必需的，指結構的數量將直接影響鋅指蛋白與不同長度的DNA結合，且多指結構與復合物的結合穩定性有關[Jeremy?M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

1997年，Sugiura等人又從人中克隆得到了一新的鋅指蛋白C2H2型Kruppel蛋白家族的成員---人鋅指蛋白5，該蛋白與已知的鼠鋅指蛋白5在蛋白水平上有極高的同源性。研究發現，來自鼠及人的鋅指蛋白5的氨基酸序列的C末端均含有保守的五個Kruppel相似的C2H2型鋅指蛋白結構域，兩者蛋白序列的N末端亦均含有保守的鋅指蛋白結構域，且兩者具有相似的生物學活性。這兩個蛋白均與鋅指蛋白C2H2型Kruppel蛋白家族的其它成員相似，在生物體基因的轉錄與表達過程中起重要的調控作用。這兩個蛋白的突變或表達異常通常將導致生物體內相關組織基因表達的異常，進而引發各種相關的代謝及發育紊亂性疾病、神經系統疾病、各種相關組織的炎癥及惡性腫瘤及癌癥等。特別的，研究發現，該蛋白在生物體內與一些皮膚病，如硬皮病、表皮肌炎等皮膚綜合癥的發生密切相關。