[發明專利]一種新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116507.0
• 申請日: 2000-06-14
• 公開（公告）號: CN1328011A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

脂溶性維生素，在體內存在著一類依賴維生素K的蛋白，脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸(Gla)蛋白(PRGP)也是其中的一種。PRGP還可以分為PRGP1和PRGP2兩種蛋白。

PRGP1和PRGP2都屬于膜內在蛋白質，各含有單一的跨膜區域，并且有脯氨酸富含的細胞質區域，該脯氨酸富含區域包含了潛在的WW結合結構域PPXY(Chen，H.I.，and?Sudol，M.，1995)。另外，這些脯氨酸富含區域包含了一些PXXP的序列拷貝以及一個SH3結合結構域，證明了PRGP蛋白與許多細胞骨架成員和信號分子的SH3區域以及WW區域相互作用的重要意義。

PRGP1的cDNA包含了一個165bp的5’非翻譯區域(UTR)，一個657bp的編碼序列和一個不多見的3.7kb的3’非翻譯區域。在2O個氨基酸的前肽斷裂后，剩下的成熟蛋白含有198個氨基酸殘基。在核苷酸的166位置處出現起始的Met密碼子，非常靠近前肽的編碼序列。在核苷酸49位上還有一個框內的終止密碼子，因此，不象所有其他的包含Gla區域的蛋白，PRGP1缺失一個可辨別的信號肽，成熟蛋白的跨膜區域(殘基58—83)作為一個‘信號錨定器’發揮作用，直接將初生的多肽定位到內質網腔中。蛋白在膜上的定位依賴于跨膜區域氨基酸殘基的相對電荷。在細胞質中的序列通常帶很多的正電荷(Hartmann，E.，Rapoport，T.A.，and?Lodish，H.F.，1989)，PRGP1的羧基末端帶有相對多的正電荷，因此存在于細胞質中。另外，在Gla區域還有一個二硫鍵環，形成內質網中的氧化環境，而不是細胞質中的還原環境。

PRGP1和PRGP2在許多組織細胞中存在，但是PRGP1在脊髓中顯示出最高的表達，而PRGP2在甲狀腺中顯示出最高的表達。

PRGP蛋白在細胞質中可能與一些含有WW區域和SH3區域的蛋白相互作用，并且，Gla區域能夠與表面富含陰離子的磷脂相互作用，尤其是磷脂酰絲氨酸(Mann，K.G.，Nesheim，M.E.et?al.，1990；Davie，E.W.，Fujikawa?K.，andKisiel，W.，1991)。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白1的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31。

由于如上所述脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。