[發(fā)明專利]一種新的多肽——RasGTP酶激活蛋白12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116501.1
• 申請日: 2000-06-14
• 公開（公告）號(hào): CN1328009A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——Ras?GTP酶激活蛋白12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

人類的基因中有一些調(diào)控正常細(xì)胞的生長。Ras基因是其中的一個(gè)亞群，至少包括三個(gè)成員，N-ras，H-ras，以及K-ras2。Ras的變異形式，被稱為抑癌基因，它被認(rèn)為是癌癥的病原體。Ras的正常細(xì)胞基因及抑癌基因都編碼化學(xué)相關(guān)的蛋白，總稱為ras?p21蛋白。無論是正常的ras?p21與抑癌基因ras?p21蛋白，都與核苷酸，GTP及GDP結(jié)合，并把GTP緩慢水解為GDP。這種內(nèi)在的GTP酶活性由細(xì)胞因子GAP刺激，其全稱為GTP酶激活蛋白，但它對(duì)抑癌基因變異相關(guān)的GTP酶活性不起作用。GAP是一種胞質(zhì)蛋白，可從胞質(zhì)轉(zhuǎn)入質(zhì)膜與p21相互作用。由于它是活性ras的GTP結(jié)合形式，因而這些蛋白被稱為ras的負(fù)調(diào)節(jié)物。

GAP家族成員都是分子量較大的蛋白(從765個(gè)殘基至3079個(gè)殘基)，但相同的保守序列是一個(gè)有限的區(qū)域(約有250個(gè)殘基)，被稱為是“催化域”或rasGAP域。該區(qū)域中最為保守的區(qū)域是一段含有15個(gè)殘基的基序，它是該蛋白家族的特征序列：[GSN]-x-[LIVMF]-[FY]-[LIVMFY]-R-[LIVMFY](2)-[GACN]-P-[AV]-[LIV](2)-[SGAN]-P。

活性ras蛋白與細(xì)胞增殖直接相關(guān)。Ras抑癌基因與各種腫瘤生長有關(guān)，并涉及10-40％最為常見的人類癌癥，例如膀胱癌，結(jié)腸癌，腎癌，肝癌，肺癌，卵巢癌，胰腺癌以及胃癌。該基因還與淋巴及骨髓造血腫瘤，間充質(zhì)起點(diǎn)瘤相關(guān)。本發(fā)明包括上述肽段的多肽，該多肽的拮抗劑，抑制劑以及激動(dòng)劑可用于診斷，預(yù)防及治療癌癥，尤其是探測正?；蛞职┗騬as?p21的過度表達(dá)并治療由ras抑癌基因引起的癌癥。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與Ras?GTP酶激活蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為Ras?GTP酶激活蛋白12。

由于如上所述Ras?GTP酶激活蛋白12蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的Ras?GTP酶激活蛋白12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新Ras?GTP酶激活蛋白12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——Ras?GTP酶激活蛋白12以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼Ras?GTP酶激活蛋白12的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼Ras?GTP酶激活蛋白12的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)Ras?GTP酶激活蛋白12的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——Ras?GTP酶激活蛋白12的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——Ras?GTP酶激活蛋白12的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與Ras?GTP酶激活蛋白12異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。