[發明專利]一種新的多肽——人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白14和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116496.1
• 申請日: 2000-06-14
• 公開（公告）號: CN1328051A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白14，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細胞對細胞外特殊信號分子的反應能力依賴于細胞具有特殊的受體。親水性信號分子包括神經遞質、生長因子、細胞因子、局部化學遞質和大多數激素，它們不能穿過質膜，只能與細胞表面的受體結合形成配體受體復合物進行信號轉導。根據信號轉導的機制和受體蛋白的類型，細胞表面受體可分為3種：(1)離子通道耦聯的受體；(2)連接酶的表面受體；(3)與G蛋白耦聯的受體。

在生物體內含有大量的生長因子受體蛋白，這些生長因子受體蛋白與各種信號因子結合，以正確地調節生物體內的各種生理反應。其中神經生長因子受體及腫瘤壞死因子受體(NGFR/TNFR)構成了一獨立的神經生長因子受體及腫瘤壞死因子受體(TNFR/NGFR)超家族[Mallet?S.，Barclay?A.N.，1991，Immunol?Today，15：220-223]。神經生長因子受體蛋白可能在生物體內調節著神經細胞對神經生長因子的信號反應，以協調神經系統的新陳代謝，發揮正常的生理功能；而腫瘤壞死因子受體在生物體內與其相關信號因子如腫瘤壞死因子結合，可有效地引起腫瘤細胞反應，促進腫瘤細胞破壞，抑制腫瘤細胞的無限增殖。該類蛋白的表達異常將導致神經系統的生長發育異常，及組織細胞的異常增殖及蛋白的異常表達，從而引發各種與之相關的疾病，如：各種惡性腫瘤及癌癥、各種神經系統病癥，各種發育紊亂癥等。

研究發現，該超家族的成員氨基酸序列N末端均含有一由110-160個氨基酸殘基組成的、富含半胱氨酸殘基的結構域。該結構域含有以下保守的一致性序列片段：C-X(4，6)-[FYH]-X(5，10)-C-X(0，2)-C-X(2，3)-C-X(7，11)-C-X(4，6)-[DNEQSKP]-X(2)-C。該結構域可分為四種不同的模式，約40個氨基酸殘基中含有6個保守的半胱氨酸殘基，其中六個半胱氨酸殘基均與鏈內二硫鍵的形成有關[Banner?D.W.，Janes?W.et?al.，1993，Cell，73：431-445]。肽鏈形成正常的構象是受體蛋白具有活性、發揮正常生理學功能的基礎。該保守的序列片段是蛋白形成活性構象的中心區域，在蛋白發揮正常功能中起著重要的調節作用。該序列片段中的氨基酸殘基突變將導致蛋白的失活。從而引發各種與該蛋白表達相關的疾病。

在細胞色素C蛋白家族的成員中，血紅素基團通過硫醚鍵與兩個保守的半胱氨酸殘基緊密結合。該結合位點含有一致的序列：C-CPWHF-CPWR-C-H-CFYW；序列中的組氨酸是血紅素鐵的兩個中心配基中的一個。該保守序列是蛋白與鐵離子結合，形成特定的結構以完成電子傳遞及能量轉換過程的重要結構區域。該中心區域的突變很可能是導致蛋白功能異常的直接原因，使蛋白不能正常的完成各種能量轉換過程，從而引發各種相關的疾病。

本發明的新的人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白亦含有神經生長因子受體及腫瘤壞死因子受體超家族N末端保守的氨基酸序列片段及一保守的細胞色素C保守序列片段，因而其為人神經生長因子受體及腫瘤壞死因子受體超家族的新成員，并與該家族的其他成員相似，具有相似的生物學功能，在生物體內與各種惡性腫瘤及癌癥、各種神經系統病癥，各種發育紊亂癥相關。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白14。

由于如上所述人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白14蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白14蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人含細胞色素C結構域的TNFR/NGFR蛋白14蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。