[發(fā)明專利]一種新的多肽——細胞色素b5－9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116487.2
• 申請日: 2000-06-14
• 公開（公告）號: CN1328005A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發(fā)明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術領域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——細胞色素b5-9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細胞色素是一組具有色素的蛋白質，在細胞的電子轉運過程中充當電子載體。這些蛋白把來自糖類，脂肪以及其他食物代謝而來的高能電子轉變?yōu)锳TP，驅動細胞多種需要能量反應的能量主要來源。細胞色素因血紅素結合基團而彼此相關，該基團由包含緊密結合一個鐵原子的卟啉環(huán)構成。鐵原子作為真正意義上的電子載體，在接受一個電子時由鐵變?yōu)閬嗚F。細胞色素從諸如NADH或是FADH2亞基的底物中接受電子，然后把它們傳給類似細胞色素或泛素等其他電子載體。細胞色素根據吸收光譜鑒別因其與血紅素基團的作用不同被分為亞組a，b，c。細胞色素a，a3亞基，b562亞基，b566亞基，c以及c1亞基都是哺乳動物中參與氧化磷酸化的線粒體膜呼吸鏈的成分。

細胞色素b5家族包括各種蛋白的血紅素結合域。一系列氧化還原酶的結構由與b5的血紅素結合域同源的血紅素結合域及黃素脫氫酶或一個鉬蝶呤域并列構成。在哺乳動物中已被發(fā)現(xiàn)的成員有兩個：細胞色素b5及亞硫酸鹽氧化酶。細胞色素b5被發(fā)現(xiàn)在線粒體和內質網中以膜結合形式存在，在紅細胞中以可溶形式存在。膜結合形式與脂類藥物代謝以及涉及NADPH的羥基化反應有關，作為幾種膜結合加氧酶的電子載體起作用。不同哺乳動物來源，包括來自人，馬，鼠，兔，豬的細胞色素b5由一條約含135個氨基酸的多肽單鏈構成，該單鏈折疊成兩個結構獨立的區(qū)域。N-端域約1-96個氨基酸殘基是一個極性催化域，血紅素基團與之非共價結合，行使催化功能的主要是30-96位氨基酸。C-端疏水域，約自第96個殘基至末端，是膜結合域，它把多肽鏈固定于線粒體膜上。人細胞色素b5的可溶形式缺乏C-端膜結合域。在哺乳動物中，血紅素結合域是高度保守的，約有84％的相似性，而哺乳動物與鳥類在這一區(qū)域約有69％的相似性。b5有兩種同源形式，一種在微粒體中發(fā)現(xiàn)，一種在線粒體外膜中發(fā)現(xiàn)。其中有兩個絲氨酸殘基作為血紅素基的軸配體。

亞硫酸鹽氧化酶，由鉬蝶呤域及血紅素結合域構成，位于線粒體膜間區(qū)，催化含硫氨基酸的氧化降解中的末端反應，并把細胞色素c作為生理電子受體。該蛋白是一種分子量為115KD的二聚體，每個單體中含有一個作為輔基的鉬原子及一個[正鐵]血紅素。此外，細胞色素b5家族種的已知成員還包括酵母的乳酸脫氫酶，真菌，植物以及細菌的硝酸還原酶，果蠅肌蛋白TU-36B，裂殖酵母假擬蛋白SpAC1F12.10c，酵母假擬蛋白YMR073c，酵母假擬蛋白YMR272的血紅素結合域。我們用包括兩個組氨酸血紅素配體中第一個配體的一段片段作為細胞色素b5家族血紅素結合域的特征模板序列：[FY]-[LIVMK]-x(2)-H-P-[GA]-G[H是一個血紅素軸配體]。

含有上述特征序列模板的多肽或該多肽的拮抗劑，激動劑及抑制劑可用于診斷預防及治療癌癥肌肉方面的疾病以及發(fā)育紊亂。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達譜與細胞色素b5的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為細胞色素b5-9。

由于如上所述細胞色素b5-9蛋白在調節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的細胞色素b5-9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新細胞色素b5-9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——細胞色素b5-9以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼細胞色素b5-9的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼細胞色素b5-9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產細胞色素b5-9的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——細胞色素b5-9的抗體。