[發(fā)明專(zhuān)利]一種新的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ9.79和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00116475.9
• 申請(qǐng)日: 2000-06-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1328155A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/61
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/61;C12N9/90;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/533;C12Q1/68;A61K38/52
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在生物體內(nèi)DNA通常以超螺旋形式存在，超螺旋又分為正超螺旋與負(fù)超螺旋兩種。所有的DNA超螺旋均由DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶催化產(chǎn)生，在許多真核生物體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)存在各種拓?fù)洚悩?gòu)酶。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可分為兩類(lèi)：一類(lèi)叫拓?fù)洚悩?gòu)酶I，一類(lèi)叫拓?fù)洚悩?gòu)酶II。拓?fù)洚悩?gòu)酶I主要負(fù)責(zé)催化DNA鏈的斷裂和重新連接，每次只作用于一條鏈，即催化瞬時(shí)的單鏈的斷裂和連接，不需能量輔因子如ATP或NAD的協(xié)同作用。拓?fù)洚悩?gòu)酶II可同時(shí)斷裂并連接雙股DNA鏈，其通常需要能量輔因子ATP的協(xié)同作用。生物體通過(guò)拓?fù)洚悩?gòu)酶I和拓?fù)洚悩?gòu)酶II的相反作用而使DNA負(fù)超螺旋達(dá)到一穩(wěn)定的狀態(tài)，并催化DNA復(fù)制的正常進(jìn)行。研究發(fā)現(xiàn)，DNA超螺旋增高，將導(dǎo)致細(xì)胞生活能力的降低，進(jìn)而影響機(jī)體的正常生長(zhǎng)發(fā)育。由此可見(jiàn)，該兩種蛋白酶在生物體遺傳物質(zhì)穩(wěn)定及作用過(guò)程中起著極為重要的作用。

人們已從多種不同的真核生物體內(nèi)拓?fù)洚悩?gòu)酶I和拓?fù)洚悩?gòu)酶II分子，并多這些蛋白的結(jié)構(gòu)及功能進(jìn)行了詳細(xì)的研究。1988年，Peter等人又從人中克隆得到了一新的拓?fù)洚悩?gòu)酶I蛋白。該蛋白與酵母及其它生物體內(nèi)的拓?fù)洚悩?gòu)酶I相似，其與體內(nèi)拓?fù)洚悩?gòu)酶II協(xié)同作用以催化體內(nèi)DNA的負(fù)超螺旋形式及遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，該蛋白的突變或表達(dá)異常將直接影響體內(nèi)遺傳物質(zhì)的存在形式、重組及相關(guān)細(xì)胞的生活能力，進(jìn)而引發(fā)各種相關(guān)的疾病[Peter?D’Arpa，Paula?S.Machlin?et?al.，1988，Proc?Natl?Acad?Sci?USA，85：2543-2547]。

由上可知，拓?fù)洚悩?gòu)酶I在維持遺傳物質(zhì)的存在及其作用過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，該蛋白的突變或表達(dá)異常將直接影響體內(nèi)遺傳物質(zhì)的存在形式及其作用活性，進(jìn)而降低相關(guān)細(xì)胞的生活能力及其相關(guān)的生物學(xué)活性的表達(dá)。該蛋白在生物體內(nèi)通常與一些相關(guān)組織的發(fā)育及代謝紊亂性疾病、免疫系統(tǒng)疾病及一些相關(guān)組織的惡性疾病等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。其還可用于診斷及治療上述各種相關(guān)的疾病。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門(mén)癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人拓?fù)洚悩?gòu)酶I的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類(lèi)似。本發(fā)明被命名為人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79。

由于如上所述人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79以及其片段、類(lèi)似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人拓?fù)洚悩?gòu)酶I9.79異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；