[發明專利]一種新的多肽——人鋅環指蛋白SAG蛋白20.46和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116451.1
• 申請日: 2000-06-12
• 公開（公告）號: CN1328034A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人鋅環指蛋白SAG蛋白20.46，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

)是一組非常活躍的，短暫存在的化學物質，它在正常的呼吸過程中或是氧化損傷之后產生。ROS包括超氧化物陰離子，過氧化氫，以及有機過氧化物。低濃度的ROS在調節一些生理過程例如增殖，分化，細胞凋亡以及老化中起作用。高濃度的ROS對細胞是劇毒的，會誘導DNA損傷，過氧化脂質，以及降解蛋白質。ROS主要在細胞凋亡的啟動/激活步驟中起作用，因為多數細胞凋亡誘導劑都產生ROS，例如放射，UV，化學試劑，神經酰胺以及生長因子(病理性)退隱等。ROS是通過修飾直接參與細胞凋亡的細胞氧化還原敏感分子，例如p53以及NF-B而間接起作用的。金屬螯合劑以及金屬離子是氧化還原敏感試劑，能夠通過Fenton反應介導ROS生成。1，10-二氮雜菲(OP)是一種典型的金屬螯合劑，能夠通過增加細胞表面APO/Fas配體的表達誘導細胞凋亡，通過螯合鋅或通過提升其氧化還原活性誘導核小體間DNA斷裂(Abello，P.A.，S.A.Fidler，G.B.Bulkley，and?T.G.Buchman.1994.Antioxidants?modulate?induction?ofprogrammed?endothelial?cell?death(apoptosis)by?endotoxin.Arch.Surg.129：134-141[Medline])。

SAG(對細胞凋亡敏感基因)可作為一種可誘導基因由氧化還原敏感的復合物兼細胞凋亡誘導物1，10-二氮雜菲(OP)克隆。SAG編碼一種新的鋅環指蛋白，在生物的進化中高度保守。鋅環指蛋白基因家族成員包括C3HC4或C3H2C3(一個半胱氨酸到組氨酸的變化)特征序列模板，并在生化反應方面參與DNA結合，RNA結合以及蛋白與蛋白間的反應。鋅環指蛋白在生物方面參與許多進程，包括腫瘤發生，信號傳導，以及發育等。SAG以高水平廣泛表達于人體組織中的耗能器官，例如骨骼肌，心臟以及睪丸，這些器官中的細胞運動需要高得多的氧，從而產生高水平的ROS，因而，這些細胞表達高水平的SAG以防止ROS-誘導的損傷，因而骨骼肌以及心臟中的橫紋肌纖維是長時間存活的細胞，而一些遺傳性肌病，包括肌營養不良以及脊柱肌萎縮就是通過細胞凋亡及壞死使肌纖維退化為特征的，因而探測SAG在這些病理細胞中的表達可用于診斷上述疾病。SAG是一種生長關鍵性基因，細胞的胞質及核中都存在有該基因，它被定位于人染色體3q22-24。純化后的人SAG與鋅及銅離子結合并防止脂質被銅或自由基發生器誘導而過氧化。當SAG在幾種人類細胞株中過量表達時，它可保護細胞不被氧化還原制劑(金屬螯合物OP以及鋅或銅金屬離子)誘導而細胞凋亡。從機理上來說，SAG可抑制并延緩金屬離子誘導的細胞色素c釋放以及caspase激活。因而，SAG是一種細胞防御性分子，作為一種抗氧化劑抑制由金屬離子與活性氧種類誘導的細胞凋亡，它可作為抗氧化劑分子在許多人類腫瘤細胞株中抑制細胞凋亡。綜上所述，SAG編碼的蛋白能夠治療癌癥，神經變形疾病，中風以及肌營養不良(HangjunDuan，1?Yuli?Wang，Molecular?and?Cellular?Biology，April?1999，p.3145-3155，Vol.19，No.4)。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與人鋅環指蛋白SAG蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人鋅環指蛋白SAG蛋白20.46。

由于如上所述人鋅環指蛋白SAG蛋白20.46蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅環指蛋白SAG蛋白20.46蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅環指蛋白SAG蛋白20.46蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。