[發(fā)明專利]一種新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91和編碼這種多肽的多核苷說(shuō)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00116434.1
• 申請(qǐng)日: 2000-06-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1327989A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

脂溶性維生素，在體內(nèi)存在著一類依賴維生素K的蛋白，脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸(Gla)蛋白(PRGP)也是其中的一種。PRGP還可以分為PRGP1和PRGP2兩種蛋白。

PRGP1和PRGP2都屬于膜內(nèi)在蛋白質(zhì)，各含有單一的跨膜區(qū)域，并且有脯氨酸富含的細(xì)胞質(zhì)區(qū)域，該脯氨酸富含區(qū)域包含了潛在的WW結(jié)合結(jié)構(gòu)域PPXY(Chen，H.I.，and?Sudol，M.，1995)。另外，這些脯氨酸富含區(qū)域包含了一些PXXP的序列拷貝以及一個(gè)SH3結(jié)合結(jié)構(gòu)域，證明了PRGP蛋白與許多細(xì)胞骨架成員和信號(hào)分子的SH3區(qū)域以及WW區(qū)域相互作用的重要意義。

PRGP1的eDNA包含了一個(gè)165bp的5’非翻譯區(qū)域(UTR)，一個(gè)657bp的編碼序列和一個(gè)不多見(jiàn)的3.7kb的3’非翻譯區(qū)域。在20個(gè)氨基酸的前肽斷裂后，剩下的成熟蛋白含有198個(gè)氨基酸殘基。在核苷酸的166位置處出現(xiàn)起始的Met密碼子，非常靠近前肽的編碼序列。在核苷酸49位上還有一個(gè)框內(nèi)的終止密碼子，因此，不象所有其他的包含Gla區(qū)域的蛋白，PRGP1缺失一個(gè)可辨別的信號(hào)肽，成熟蛋白的跨膜區(qū)域(殘基58-83)作為一個(gè)‘信號(hào)錨定器’發(fā)揮作用，直接將初生的多肽定位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中。蛋白在膜上的定位依賴于跨膜區(qū)域氨基酸殘基的相對(duì)電荷。在細(xì)胞質(zhì)中的序列通常帶很多的正電荷(Hartmann，E.，Rapoport，T.A.，and?Lodish，H.F.，1989)，PRGP1的羧基末端帶有相對(duì)多的正電荷，因此存在于細(xì)胞質(zhì)中。另外，在Gla區(qū)域還有一個(gè)二硫鍵環(huán)，形成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的氧化環(huán)境，而不是細(xì)胞質(zhì)中的還原環(huán)境。

PRGP1和PRGP2在許多組織細(xì)胞中存在，但是PRGP1在脊髓中顯示出最高的表達(dá)，而PRGP2在甲狀腺中顯示出最高的表達(dá)。

PRGP蛋白在細(xì)胞質(zhì)中可能與一些含有WW區(qū)域和SH3區(qū)域的蛋白相互作用，并且，Gla區(qū)域能夠與表面富含陰離子的磷脂相互作用，尤其是磷脂酰絲氨酸(Mann，K.G.，Nesheim，M.E.et?al.，1990；Davie，E.W.，F(xiàn)ujikawa?K.，andKisiel，W.，1991)。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白1的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91。

由于如上所述脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白18.91異常相關(guān)的疾病的方法。