[發明專利]一種新的多肽——異青霉素N合成酶31和編碼這種多肽的多核苷酸無效

申請號：	00116426.0	申請日：	2000-06-12
公開（公告）號：	CN1328141A	公開（公告）日：	2001-12-26
發明（設計）人：	毛裕民;謝毅	申請（專利權）人：	上海博德基因開發有限公司
主分類號：	C12N15/53	分類號：	C12N15/53;C12N9/02;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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地址：	200092 上海市***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種多肽青霉素合成 31 編碼這種多核苷酸
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【說明書】：

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——異青霉素N合成酶31，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

異青霉素N合成酶(IPNS)是一種非血紅素的鐵依賴的氧化酶，它催化青霉素與頭胞菌素的前體——異青霉素(IPN)的生物合成。這一反應的關鍵步驟是將δ-(L-α-氨基己二酰)-L-半胱氨酰-D-纈氨酸(ACV)去掉鐵和抗壞血酸鹽，形成異青霉素。IPNS是一個大約有330氨基酸殘基的酶。在真菌和細菌的IPNS序列中有兩個半胱氨酸殘基是保守的。

在頭胞菌中，DAOCS/DACS是一種催化頭胞菌素生物合成的酶。DAOCS結構域與IPNS的結構相似，催化從青霉素N到去乙酰頭胞菌素的反應。鏈霉菌中的DAOCS酶也與IPNS相關。

這些酶的保守序列是：[RK]-x-[STA]-x(2)-S-x-C-Y-[SL]

另一個保守序列是：[LIVM](2)-x-C-G-[STA]-x(2)-[STAG]-x(2)-T-x-[DNG]

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與異青霉素N合成酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為異青霉素N合成酶31。

由于如上所述異青霉素N合成酶31蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的異青霉素N合成酶31蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新異青霉素N合成酶31蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——異青霉素N合成酶31以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼異青霉素N合成酶31的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼異青霉素N合成酶31的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產異青霉素N合成酶31的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——異青霉素N合成酶31的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——異青霉素N合成酶31的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與異青霉素N合成酶31異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；