[發(fā)明專利]一種新的多肽——人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白12和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00116415.5
• 申請(qǐng)日: 2000-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN1328017A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外特殊信號(hào)分子的反應(yīng)能力依賴于細(xì)胞具有特殊的受體。親水性信號(hào)分子包括神經(jīng)遞質(zhì)、生長因子、細(xì)胞因子、局部化學(xué)遞質(zhì)和大多數(shù)激素，它們不能穿過質(zhì)膜，只能與細(xì)胞表面的受體結(jié)合形成配體受體復(fù)合物進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。根據(jù)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制和受體蛋白的類型，細(xì)胞表面受體可分為3種：(1)離子通道耦聯(lián)的受體；(2)連接酶的表面受體；(3)與G蛋白耦聯(lián)的受體。

在生物體內(nèi)含有大量的生長因子受體蛋白，這些生長因子受體蛋白與各種信號(hào)因子結(jié)合，以正確地調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的各種生理反應(yīng)。其中神經(jīng)生長因子受體及腫瘤壞死因子受體(NGFR/TNFR)構(gòu)成了一獨(dú)立的神經(jīng)生長因子受體及腫瘤壞死因子受體(TNFR/NGFR)超家族[Mallet?S.，Barclay?A.N.，1991，Immunol?Today，15：220-223]。神經(jīng)生長因子受體蛋白可能在生物體內(nèi)調(diào)節(jié)著神經(jīng)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)生長因子的信號(hào)反應(yīng)，以協(xié)調(diào)神經(jīng)系統(tǒng)的新陳代謝，發(fā)揮正常的生理功能；而腫瘤壞死因子受體在生物體內(nèi)與其相關(guān)信號(hào)因子如腫瘤壞死因子結(jié)合，可有效地引起腫瘤細(xì)胞反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞破壞，抑制腫瘤細(xì)胞的無限增殖。該類蛋白的表達(dá)異常將導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的生長發(fā)育異常，及組織細(xì)胞的異常增殖及蛋白的異常表達(dá)，從而引發(fā)各種與之相關(guān)的疾病，如：各種惡性腫瘤及癌癥、各種神經(jīng)系統(tǒng)病癥，各種發(fā)育紊亂癥等。

研究發(fā)現(xiàn)，該超家族的成員氨基酸序列N末端均含有一由110-160個(gè)氨基酸殘基組成的、富含半胱氨酸殘基的結(jié)構(gòu)域。該結(jié)構(gòu)域含有以下保守的一致性序列片段：C-X(4，6)-[FYH]-X(5，10)-C-X(0，2)-C-X(2，3)-C-X(7，11)-C-X(4，6)-[DNEQSKP]-X(2)-C。該結(jié)構(gòu)域可分為四種不同的模式，約40個(gè)氨基酸殘基中含有6個(gè)保守的半胱氨酸殘基，其中六個(gè)半胱氨酸殘基均與鏈內(nèi)二硫鍵的形成有關(guān)[Banner?D.W.，Janes?W.etal.，1993，Cell，73：431-445]。肽鏈形成正常的構(gòu)象是受體蛋白具有活性、發(fā)揮正常生理學(xué)功能的基礎(chǔ)。該保守的序列片段是蛋白形成活性構(gòu)象的中心區(qū)域，在蛋白發(fā)揮正常功能中起著重要的調(diào)節(jié)作用。該序列片段中的氨基酸殘基突變將導(dǎo)致蛋白的失活。從而引發(fā)各種與該蛋白表達(dá)相關(guān)的疾病。

在細(xì)胞色素C蛋白家族的成員中，血紅素基團(tuán)通過硫醚鍵與兩個(gè)保守的半胱氨酸殘基緊密結(jié)合。該結(jié)合位點(diǎn)含有一致的序列：C-CPWHF-CPWR-C-H-CFYW；序列中的組氨酸是血紅素鐵的兩個(gè)中心配基中的一個(gè)。該保守序列是蛋白與鐵離子結(jié)合，形成特定的結(jié)構(gòu)以完成電子傳遞及能量轉(zhuǎn)換過程的重要結(jié)構(gòu)區(qū)域。該中心區(qū)域的突變很可能是導(dǎo)致蛋白功能異常的直接原因，使蛋白不能正常的完成各種能量轉(zhuǎn)換過程，從而引發(fā)各種相關(guān)的疾病。

本發(fā)明的新的人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白亦含有神經(jīng)生長因子受體及腫瘤壞死因子受體超家族N末端保守的氨基酸序列片段及一保守的細(xì)胞色素C保守序列片段，因而其為人神經(jīng)生長因子受體及腫瘤壞死因子受體超家族的新成員，并與該家族的其他成員相似，具有相似的生物學(xué)功能，在生物體內(nèi)與各種惡性腫瘤及癌癥、各種神經(jīng)系統(tǒng)病癥，各種發(fā)育紊亂癥相關(guān)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白12。

由于如上所述人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白12蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人含細(xì)胞色素C結(jié)構(gòu)域的TNFR/NGFR蛋白12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。