[發(fā)明專利]一種新的多肽——人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116359.0
• 申請日: 2000-06-07
• 公開（公告）號: CN1326973A
• 公開（公告）日: 2001-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

膜中的大型糖蛋白，它是異源三聚體分子(Ekblom，P.，and?R，Timpl.1996.The?Laminins.In?Cell?Adhesion?and?Communication.Vol.2.C.Goridis.editor.Harwood?Academic?Publishers，The?Netherlands.321?pp.)。層粘連蛋白是十字交叉型的，有一個單一的長臂，自三條遺傳上不同的多肽鏈的卷曲螺旋作用中伸出，還有三個N-端短臂。三個亞基鏈被稱為alpha，beta，以及gamma。這三條鏈都具有被N-端短臂中的多重類表皮生長因子域隔開的球型域。它們的長臂部分由七個alpha-螺旋卷曲螺旋蛋白中典型的重復(fù)構(gòu)成。層粘連蛋白廣泛的功能衍生自它們的結(jié)構(gòu)以及信號作用，它們與形成以及穩(wěn)固基底膜，穩(wěn)定細(xì)胞與基底膜的連接以及通過占據(jù)細(xì)胞表面受體來介導(dǎo)細(xì)胞骨架重排有關(guān)(Ryan，M.C.，R.Tizard，D.R.VanDevanter，J.Biol.Chem.269：22779-22787，(1994))。

近來發(fā)現(xiàn)一種新的gamma鏈，gamma3鏈?zhǔn)欠植荚趥鹘y(tǒng)的基底膜以外的新的層粘連蛋白類型，該鏈中含有g(shù)amma鏈中所有的區(qū)域，包括兩個共有的糖基化位點以及一個巢蛋白結(jié)合位點，這些都表明含有g(shù)amma3蛋白的層粘聯(lián)蛋白存在于穩(wěn)固的基質(zhì)中。Gamma3鏈廣泛表達(dá)于皮膚，心臟，肺，以及生殖道中。在皮膚，gamma3蛋白存在于神經(jīng)穿刺位點的皮層接點的基底膜中。Gamma3鏈還是肺，輸卵管，附睪，輸精管以及生精小管纖毛上皮細(xì)胞的頂端表面的主要成分。含有g(shù)amma3的層粘連蛋白在各種上皮組織頂端表面的分布說明它們不存在于超微結(jié)構(gòu)定義的基底膜中。這些頂端層粘連蛋白在這些細(xì)胞中的纖毛進程的形態(tài)發(fā)生以及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性中十分重要。Gamma3基因被定位于染色體的9q31-q34位上，這一區(qū)域與四種不同程度的神經(jīng)功能異常相關(guān)：福山性先天性肌營養(yǎng)不良(綜合征)(唯一中常染色體隱性遺傳性肌萎縮，嬰兒尤為明顯，肌異常類似杜興肌營養(yǎng)不良，患者智力遲鈍，伴多小腦回及其他大腦異常)；肌肉-眼睛-腦綜合征；沃-瓦綜合征(一種先天性綜合征，通常在一歲前即死亡，包括腦積水，無腦回，各種眼異常，諸如視網(wǎng)膜發(fā)育不全，角膜混濁或小眼，有時為腦突出)；以及眼點-21視網(wǎng)膜炎伴隨耳聾(RP-21)。而gamma3基因尤其與RP-21相關(guān)，該基因突變或缺失會引發(fā)RP-21(Manuel?Koch，Pamela?F.Olson，Journal?of?Cell?Biology，Vol.145，No.3，(1999)605-617)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85。

由于如上所述人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人層粘連蛋白γ3鏈(LAMC3)69.85的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。