[發(fā)明專利]一種新的多肽——人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116327.2
• 申請日: 2000-06-05
• 公開（公告）號: CN1326961A
• 公開（公告）日: 2001-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

受體結(jié)構(gòu)和功能的研究重點在于在正常狀態(tài)和疾病狀態(tài)下的膽固醇內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性以及細胞內(nèi)吞作用的細胞生物學(xué)[Brown，M.S.and?Goldstein.J.L.1986.Science，232，34-47]。LDL受體不可能是阿撲脂蛋白E(apoE)的唯一受體，因為乳糜微粒殘余、HDLc和β-VLDL微粒水平并在動物或缺乏LDL受體病人體內(nèi)并沒有升高。而且，在過表達LDL-受體的轉(zhuǎn)基因鼠中，LDL聚集現(xiàn)象減少[Hoffman，S.L.，Rus?sell，D.W.，et?al.，19?88.Science，239，1277-1281]。在肝臟這個脂蛋白代謝的中心器官中，發(fā)現(xiàn)有低摩爾量的wt阿撲脂蛋白E結(jié)合蛋白，但是這些結(jié)合蛋白并不是真正的阿撲脂蛋白E受體，阿撲脂蛋白E受體是那些高摩爾量的wt脂蛋白受體[Hoeg，J.M.，Demosky，S.J.，Lackner，K.J.，etal..1986.Biochem.Biophys.Acta，876，13-21]。不同的阿撲脂蛋白E受體可能同時與損傷性神經(jīng)組織的再生功能、免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)以及細胞生長和分化的調(diào)節(jié)有關(guān)[Mahley，R.W.1988.Science.240，622-630]。直到現(xiàn)在，還沒有受體被純化或克隆出來。但是，已經(jīng)克隆出了一個與LDL-受體以及表皮生長因子前體同源性非常高的細胞表面蛋白，取名為LDL-受體相關(guān)蛋白(LRP)。

LDL-受體相關(guān)蛋白都是由LDL-受體和EGF-前體的序列結(jié)構(gòu)域組成。該分子可能包括以下功能區(qū)域：(1)與LDL-受體相似的由四個拷貝組成的分子外結(jié)構(gòu)域；(2)一個與EGF相似的生長因子重復(fù)區(qū)域；(3)一個轉(zhuǎn)膜片段；(4)一個細胞質(zhì)尾巴，可能包含引導(dǎo)積聚物質(zhì)進入內(nèi)吞小窩的兩拷貝的信號肽。

在LDL-受體相關(guān)蛋白的分子外結(jié)構(gòu)域中，有四個A類半胱氨酸富含結(jié)構(gòu)域簇，這些結(jié)構(gòu)域簇類似于LDL-受體中負責與阿撲脂蛋白B和阿撲脂蛋白E結(jié)合的結(jié)構(gòu)域[Yamamo?to，T.，Davis，CG.，Brown，M.S.，Schneider，WJ.，etal.，1984.Cell.39，27-38]。這些結(jié)構(gòu)域總共帶有158個負電荷，其共有序列比末端的補足成分更象LDL-受體。這表明該分子是一個能與脂蛋白微粒中帶正電荷的配基(例如阿撲脂蛋白B或阿撲脂蛋白E)結(jié)合的表面受體蛋白。

LDL-受體與高膽甾醇血病直接相關(guān)。LDL-受體的研究對細胞內(nèi)吞作用的了解意義非凡，并將使基因治療成為可能。LDL-受體相關(guān)蛋白因為與LDL-受體蛋白的結(jié)構(gòu)和生化特征密切相關(guān)，所以它可能是另一種脂蛋白受體家族的成員，該脂蛋白受體與不同的包括阿撲脂蛋白E和阿撲脂蛋白B的配基有特異性結(jié)合。研究表明，LDL-受體相關(guān)蛋白與動脈硬化癥密切相關(guān)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1?024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69。

由于如上所述人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8.69的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。