[發(fā)明專(zhuān)利]一種新的多肽——胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00116321.3
• 申請(qǐng)日: 2000-06-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1326955A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

)-1和IGF-II都是在結(jié)構(gòu)和功能上與前胰島素原同源的促有絲分裂多肽[Rinderknecht?E，Humbel?R.1978.J?Biol?Chem?253：2769-2776][Froesch?ER，Schmid?C?et?al.，Rev?Physio147：443-467]。IGF在軟骨和其它組織中對(duì)GH生長(zhǎng)促進(jìn)效應(yīng)物的調(diào)節(jié)是現(xiàn)在生物學(xué)家研究的重點(diǎn)，并且IGF可能同時(shí)在胎兒的生長(zhǎng)和發(fā)育中起著非常重要的作用，尤其是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。

IGF與許多蛋白都有非常強(qiáng)的親和力，很少單獨(dú)存在。在細(xì)胞表面，IGF與IGF-1和IGF-II的膜結(jié)合受體緊密結(jié)合，同時(shí)也有可能與其他的膜結(jié)合蛋白結(jié)合[DeVrode?M，Tseng?L，Katsoyanni?s?P?et?al.，1986.J?Clin?Invest?77：602-613]。到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了分子量為150、30、53kDa的和其他分子量從24到160?kDa的特異性結(jié)合蛋白。所有的30?kDa的結(jié)合蛋白質(zhì)有相似的氨基酸組成，并且在N末端的前10個(gè)氨基酸是一致的。很可能這些蛋白是同一種蛋白，而53?kDa蛋白由于有自己特別的N末端序列而出現(xiàn)與30?kDa蛋白的結(jié)構(gòu)差異性[BaxterR，Martin?J1987.Biochem?Biophys?Res?Commun147：408-415]?，F(xiàn)在還不清楚的是，30?kDa結(jié)合蛋白是不是53?kDa和150?kDa結(jié)合蛋白的組成成分，或者是不是他們的非共價(jià)鍵結(jié)合的亞基或是同一個(gè)結(jié)合蛋白的不同RNA剪接形式。由人HEP?G2肝細(xì)胞瘤細(xì)胞產(chǎn)生的IGF結(jié)合蛋白，，分子量為25，274，命名為IGF?BP-25。IGF-BP完整cDNA有1553個(gè)bp，包括164bp的5’非編碼區(qū)，一個(gè)777bp的開(kāi)放閱讀框以及一個(gè)612bp的3’非編碼區(qū)，其中612bp的3’非編碼區(qū)有一個(gè)位于3’-poly(A)尾巴上游區(qū)域12bp腺甘酸化信號(hào)。IGF-BP蛋白N末端的25個(gè)氨基酸殘基包含了典型的分裂信號(hào)肽成分：一個(gè)帶有正電荷氨基酸殘基(8個(gè))的N末端區(qū)域，一個(gè)疏水性中心區(qū)域(8個(gè)氨基酸)和一個(gè)極性的C末端區(qū)域。成熟IGF?BP-25有234個(gè)氨基酸殘基，N末端的59個(gè)氨基酸殘基組成了一個(gè)半胱氨酸富含區(qū)。在該結(jié)構(gòu)域內(nèi)，半胱氨酸殘基占了19％，并且它們的間距是規(guī)則的。這些半胱氨酸殘基對(duì)于結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)和功能都起著非常重要的作用。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門(mén)癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類(lèi)似。本發(fā)明被命名為胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11。

由于如上所述胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11以及其片段、類(lèi)似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——胰島素類(lèi)似生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白44.11的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。