[發明專利]一種新的多肽——G－底物蛋白12.43和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116317.5
• 申請日: 2000-06-05
• 公開（公告）號: CN1326952A
• 公開（公告）日: 2001-12-19
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——G-底物蛋白12.43，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

經系統中，小腦在運動的調節過程中起著非常重要的作用(Ito，M.，1984；Thach，W.T.，1998)。小腦中存在一種G-底物蛋白，它是少數幾個cGMP依賴的蛋白激酶(PKG)的優先底物之一(Nairn，A.C.，Hemmings，H.C.，Jr.&Greengard，P.，1985；Aitken，A.，Bilham，T.et?al.，1981)。G-底物蛋白集中于小腦的Purkinje細胞中，并且比較靠近PKG(Qian，Y.，Chao，D.S.，Santillano，D.R?et?al.，1996)，因此它屬于PKG的下游組分，同時也參與小腦的LTD反應，人的G底物mRNA只發現在小腦中有表達。

將人的G-底物蛋白的基因重組體轉入大腸桿菌中進行表達，得到的蛋白與兔子小腦的G-底物蛋白在序列結構上非常相似。更為重要的是，純化的G-底物能夠被cGMA依賴的蛋白激酶磷酸化，因此它是一個高效的蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制劑。G-底物蛋白含有兩個磷酸化位點，即Thr68和Thr119。將人與兔的G-底物蛋白進行序列比較，發現其在磷酸化位點上是保守的，不僅如此，在其它區域上也顯示了很高的保守性，充分表明了兩者的同源性。

全長的G-底物cDNA克隆包含了一個1.7Kb的插入序列，一個3’末端的多聚A尾巴和一個短的5’非翻譯區域。cDNA上含有三個mRNA擾動信號(ATTTA)(Shaw，G.&Kamen，R.，1986)和一個在開放閱讀框終止密碼子之后出現的多聚A信號(AATAAA)。在5’非翻譯區也包含一個框內終止密碼子。

全長的cDNA含有一個465Bp的開放閱讀框，編碼了一條共有155個氨基酸殘基的蛋白，其中有64個帶電荷的氨基酸以及36個基本氨基酸。人的G-底物蛋白多肽是親水性的，并且還屬于熱穩定性蛋白。

人的G-底物蛋白定位于染色體7p15上，值得注意的是，另外也有一些與神經遺傳性疾病相關的基因也位于該染色體上的附近位置。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與G-底物蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為G-底物蛋白12.43。

由于如上所述G-底物蛋白12.43蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的G-底物蛋白12.43蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新G-底物蛋白12.43蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——G-底物蛋白12.43以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼G-底物蛋白12.43的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼G-底物蛋白12.43的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產G-底物蛋白12.43的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——G-底物蛋白12.43的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——G-底物蛋白12.43的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與G-底物蛋白12.43異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；