[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116289.6
• 申請日: 2000-05-31
• 公開（公告）號: CN1325906A
• 公開（公告）日: 2001-12-12
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人鋅指蛋白10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

蛋白質含有鋅指特征已知道參與多種有機體(酵母、果蠅、爪蟾、小鼠、人)的發育和正常細胞的生長和分化以及腫瘤的增殖。鋅指模式的核酸束縛特性是由于它的第三位折疊和鋅離子的四面體同等，折疊結構通過一些親水的殘基互相作用于核酸。

在植物中，大約有30個蛋白被報道含有或者一個、二個、三個或四個鋅指。植物鋅指蛋白特征是相鄰的鋅指之間有不同的間距和一個高度保守的序列。每個指定位一個假定的DNA接觸表面，它們特異性識別目標DNA。一些真核和病毒蛋白含有保存的40-60殘基半胱氨酸富集區，結合2個原子的鋅，可能參與協調蛋白-蛋白互相作用，鋅絡合物系統的3D結構對環形區域來說是唯一的，在這樣一個區域內半胱氨酸的間距是C3HC4排列。

許多鋅指蛋白基因在不同物種中被視作生物重要性的基本特征，同源基因有共同的祖先和折疊，這是鋅指蛋白特別的證據。

我們從人胎腦組織中克隆到的新基因，基因號0398H01，它包含的多核苷酸序列全長為3792bp，閱讀框起始點121，中止位置813，編碼了230個氨基酸，是一個鋅指結構蛋白，它包含C3HC4區域，推測其可能是一個轉錄因子，通過一系列不同特異性的DNA識別和結合，參與調節基因的表達。研究思路是用這個基因的鋅指區域作為探針去篩選一個人類真核基因庫，鑒定其cDNA克隆，然后用RT-PCR方法去檢測所屬的細胞系，從而揭示它的功能。我們的這一個新基因所編碼的鋅指蛋白，具有結合2個鋅原子的半胱氨酸富集區，從細胞生物學的角度來看，基本營養物象半胱氨酸、鋅、銅和維他命C和E是維持最佳(免疫)細胞功能必不可少的，在進化發展中可利用的這些營養物的最佳分配一般可防止疾病，當然最根本還是依靠遺傳和環境因素。正確數量的半胱氨酸、銅和鋅離子在正確的地方在適當的時候以適當的方式被利用可防止AIDS病毒的繁殖，鋅和銅離子抑制/阻礙激活基本蛋白分裂酶，象HIV蛋白酶，另一方面，通過鋅指分子結構，鋅離子直接或間接調控T細胞抗病毒活動，鋅離子和銅離子通過半胱氨酸和谷胱甘肽保存有充足的數量是有效的AIDS病毒天然抑制物，因此能防止慢性病毒疾病的發展及最終導致艾滋病、自身免疫疾病、過敏或腫瘤。一種安全的相當便宜和可廣泛使用的內服藥象N-乙酰半胱氨酸能幫助補充額外的半胱氨酸，而抗HIV多肽T22，能作為半胱氨酸和鋅支持或攜帶分子來阻礙HIV通過CD4受體進入細胞。綜上所述，通過和包含C3HC4鋅指蛋白家族的分析比較以及對我們這一個新基因的功能推測，認為這一個新基因在防止艾滋病、人類自身免疫疾病、過敏和抗腫瘤的藥物開發方面具有極大的應用前景。

本發明的多肽被推斷鑒定為一種新的人鋅指蛋白。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與人鋅指蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人鋅指蛋白10。

由于如上所述人鋅指蛋白10蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人鋅指蛋白10以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白10的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人鋅指蛋白10的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人鋅指蛋白10的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人鋅指蛋白10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。