[發(fā)明專利]一種新的多肽——人NADH脫氫酶亞單位I－11和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116272.1
• 申請日: 2000-05-31
• 公開（公告）號: CN1325975A
• 公開（公告）日: 2001-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/32;C12Q1/68;A61K38/44
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人NADH脫氫酶亞單位I-11，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

呼吸鏈NADH脫氫酶(也稱之為復(fù)合物I或NADH-輔酶Q氧化還原酶)是一種多聚酶復(fù)合物，存在于線粒體內(nèi)膜、葉綠體及藍(lán)細(xì)菌中。在藍(lán)細(xì)菌中，其又被作為一種NADH-質(zhì)體醌氧化還原酶。該酶復(fù)合物由25-30個(gè)多聚肽鏈亞單位組成，其中有15個(gè)亞單位存在于膜上，而這15個(gè)亞單位中的7個(gè)在許多不同的物種中均由線粒體和葉綠體基因組編碼。由這些細(xì)胞器編碼的保守的亞單位被稱之為亞單位I(由線粒體中的ND1基因及葉綠體中的NDH1基因編碼)，其中含有輔酶Q結(jié)合位點(diǎn)[Weidner?U.,Geier?S.et?al.,1993,J?Mol?Biol,233:109-122]。

呼吸鏈NADH脫氫酶酶復(fù)合物的ND1亞單位與大腸桿菌甲酸脫氫酶的亞單位4及脫氫酶4的亞單位C有著高度的相似性。Paracoccus反硝化NQ08蛋白及大腸桿菌nuoH?NADH輔酶Q氧化還原酶亞單位亦為NADH脫氫酶亞單位I家族的成員。該蛋白家族的成員在生物體內(nèi)均參與各種呼吸鏈的反應(yīng)，作為電子傳遞的中間物，負(fù)責(zé)將電子傳遞給氧，生成氧離子，與2H⁺結(jié)合成H₂O。

眾所周知，呼吸鏈?zhǔn)巧矬w內(nèi)電子傳遞及能量轉(zhuǎn)換的重要方式，而呼吸鏈反應(yīng)過程中涉及各種不同酶的作用。這些不同的酶在呼吸鏈過程中協(xié)調(diào)作用以促進(jìn)呼吸代謝過程的完成。其中的任意一種物質(zhì)突變或表達(dá)異常都將導(dǎo)致呼吸鏈的作用異常。因而，NADH脫氫酶復(fù)合物作為呼吸鏈的重要組成部分亦在此過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，其表達(dá)異常將導(dǎo)致生物體內(nèi)呼吸鏈能量代謝的紊亂，從而引發(fā)各種相關(guān)的代謝紊亂癥。

除西瓜及利什曼原蟲屬的ND1亞單位不含有序列片段1及萊因哈德衣藻不含有序列片段2外，其余該酶亞單位家的成員均同時(shí)含有以上所述的兩個(gè)保守的序列片段。該兩個(gè)序列片段可能是酶復(fù)合物亞單位I的活性作用中心，其突變將導(dǎo)致亞單位的表達(dá)異常，不能與輔酶Q正常的結(jié)合，從而影響其在呼吸鏈中的作用。該蛋白家族的成員的表達(dá)異常通常與生物體內(nèi)各種與呼吸鏈相關(guān)的發(fā)育代謝紊亂癥、物質(zhì)代謝紊亂癥等疾病的發(fā)生相關(guān)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株以及前列腺組織中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人NADH脫氫酶亞單位I-11的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人NADH脫氫酶亞單位I-11。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人NADH脫氫酶亞單位I的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人NADH脫氫酶亞單位I-11。

由于如上所述人NADH脫氫酶亞單位I-11蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人NADH脫氫酶亞單位I-11蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人NADH脫氫酶亞單位I-11蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--人NADH脫氫酶亞單位I-11以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人NADH脫氫酶亞單位I-11的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人NADH脫氫酶亞單位I-11的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人NADH脫氫酶亞單位I-11的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人NADH脫氫酶亞單位I-11的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對本發(fā)明多肽--人NADH脫氫酶亞單位I-11的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。