[發明專利]一種新的多肽——鈉泵的beta亞基9和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116264.0
• 申請日: 2000-05-31
• 公開（公告）號: CN1325867A
• 公開（公告）日: 2001-12-12
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——鈉泵的beta亞基9，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鈉泵(Na+,K+ATPase)存在于所有動物細胞的質膜中。鈉泵通過調節質膜兩側離子濃度(鈉離子轉出，鉀離子轉入并且伴隨ATP的水解)，進而控制細胞的離子梯度、滲透平衡和膜電位等等。鈉泵由兩個亞基所構成：異源三聚體組成的α亞基(具有催化功能)和異源二聚體組成的β亞基。

鈉泵的β亞基根據物種和所在組織不同，包含302-304個氨基酸不等。β亞基穿過細胞膜一次，其氨基末端的大約35個殘基位于細胞質內。由于一級結構的相似性，決定了β亞基相同的二級結構。從氨基末端到第一個糖蛋白結合位點表現為α-螺旋；羧基末端的多肽主要為β-折疊和兩段短的螺旋；跨膜部分則包含三個強親水性的螺旋。

β亞基就目前所知有三個異構體，β1和β3有三個糖基化位點而β2有七個糖基化位點；所有的β異構體都有六個位置保守的Cys殘基，這些Cys形成的三個二硫鍵可以保持多肽三級結構的穩定性。

在所有的β亞基中均發現有這樣兩個相同的殘基序列。第一個位于胞內域中，其順序為：(Phe,Tyr,Trp)-X(2)-(Phe,Tyr,Trp)-X-(Phe,Tyr,Trp)-(Asp,Asn)-X(6)-(Leu,Ile,Val,Met)-Gly-Arg-Thr-X(3)-Trp。第二個位于胞外域中，包含一個由兩個Cys組成的二硫鍵，其順序為：(Arg,Lys)-X(2)-Cys-(Arg,Lys,Gln,TRp,Ile)-X(5)-Leu-X(2)-Cys-(Ser,Ala)-Gly。(其中X表示任意氨基酸殘基，一種鹽水小蝦(brine?shrimp)其鈉泵β亞基不包含第二條序列。)

在鈉泵合成及轉運到質膜表面的過程中β亞基起了重要的調節作用。胃的質子泵(K+,H+ATPase)也包含兩個亞基，它的β亞基和鈉泵的β亞基非常相似。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與鈉泵的beta亞基的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為鈉泵的beta亞基9。

由于如上所述鈉泵的beta亞基9蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的鈉泵的beta亞基9蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新鈉泵的beta亞基9蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——鈉泵的beta亞基9以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼鈉泵的beta亞基9的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼鈉泵的beta亞基9的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產鈉泵的beta亞基9的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——鈉泵的beta亞基9的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——鈉泵的beta亞基9的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與鈉泵的beta亞基9異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。